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离 心 技 术 化学与生命科学学院 离心技术（centrifugal technique） 是根据颗粒在匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的行为发展起来的一种分离分析技术。 一、离心技术的应用 1.用于生物、医学、化学等实验室分析研究的，转速从每分钟几千到几万转以上，此类技术的使用目的在于分离和纯化样品，以及对纯化的样品有关性能进行研究。 2.用于工业生产的，如化工、制药、食品等工业大型制备用的离心技术，转速都在每分钟5000转以下。 二、离心机基本组件 1.低速离心机 转子 速度控制系统 最高转速在6000rpm以下 实验室中常用于分离制备。 转子(Rotor) 固定角式转子(fixed-angle rotor) 水平转子(Swing-bucket rotor) 垂直转子(vertical rotor) 带状转子(zonal rotor) 连续转子(continuous rotor) 1.固定角式转子 离心管在离心机中放置的位置与旋转轴心形成一个固定的角度,角度变化在14-40°之间。 2.水平转子 （1）转子静止时,处在转子中的离心管中心线与旋转轴平行； （2）转子旋转加速时,离心管中心线由平位置逐渐过渡到垂直位置,即与旋转轴成90°角。 水平转子的特点： （1）转子的重心位置较高 （2）样品粒子沉降穿过溶剂层的距离大于直径 （3）对于多种成分样品分离特别有效 （4）常用于速率区带离心和等密度离心 三、基本原理 1.转速 （1）rpm Revolutions Per Minute 为每分钟转速（转/分） （2）ω 角速度：每秒转过的弧度数(弧度/秒) 1 弧度即为弧长等于半径的圆弧所对的圆心角 ω＝ 2.离心力 Centrifugal force (F) F离心力= mω2r m: 质量 ω: 旋转角速度 r：旋转体离旋转轴的距离 3.相对离心力 Relative centrifugal force (RCF) RCF就是实际离心力转化为重力加速度的倍数，通常用×g表示 RCF＝ F离心力/F重力 ＝ mω2r/m·g=ω2r/g ＝ 1.118 × 10-5 ×(rpm)2 × r半径 4.离心转速换算公式（rpm与g） 离心速度1000rpm与1000g有什么区别？ （Eppendorf 5415C 1000g 对应 3066rpm） （BOECO M-24 1000g 对应 3222rpm） g（RCF）＝1.118 × 10-5 ×(rpm)2 × r半径 运用离心力列线图换算rpm与g 5.沉降系数 Sedimentation coefficient (S) 样品颗粒的大小 形状 密度 溶剂的粘度、密度 离心加速度 S=  ?X1: 离心前粒子离旋转轴的距离X2: 离心后粒子离旋转轴的距离 6.沉降速度 Sedimentation velocity 定义：指在强大离心作用下，单位时间内物质运动的距离。 四、离心分离方法 制备型超高速离心机的几种分离方法： A．差速离心： 速率区带法（rate zonal） B．密度梯度离心法： 等密度离心法（isopycnic） A．差速离心： 利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别,在同一离心条件下,沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分步沉淀。 差速离心的特点是操作简单，但分离纯度不高。 主要细胞成分的大小 细胞核 4-12 ?m 质膜 3-20 ?m 高尔基体 1-2 ?m 线粒体 0.4-2.5 ?m 溶酶体/过氧化物酶 0.4-0.8 ?m 微粒小泡 0.05-0.3?m 匀浆组织的差速离心（Ⅰ） 匀浆组织的差速离心（Ⅱ） 组织匀浆 – 1000g for 10 min 上清 from 1 – 3000g for 10 min 上清 from 2 – 15,000g for 15 min 上期 from 3 – 100,000g for 45 min 差速离心（Ⅲ） B、密度梯度离心 对不同粒