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第 33 卷 第 3 期 北 京 化 工 大 学 学 报 Vol. 33 , No. 3 2006 年 JOURNAL OF BEIJ IN G UN IV ERSIT Y OF CHEMICAL TECHNOLO GY 2006 压力脉动固态发酵微生物蛋白质及机理的研究 1 ,2 2 2 1 付小果 　陈洪章 , 　李宏强 , 　马润宇 ( 1 北京化工大学可控化学反应科学与技术基础教育部重点实验室 , 北京 　100029 ; 2 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 , 北京 　100080) 摘 　要 : 研究了固态发酵微生物蛋白质的提取和纯化条件 , 以及压力脉动对固态发酵微生物蛋白质的影响,初步探 讨了压力脉动固态发酵的作用机理。结果表明 ,在发酵后的酶曲中 ,加入 TrisHCl 提取液 ,得到的胞内蛋白质的量 较多 ,FPA 酶活与 CMCase 酶活回收率分别为 836 %与 67 % ,纯化效果较好。从压力脉动外界周期刺激固态发酵 干酶曲中提取的蛋白质与从未加周期刺激的微生物中提取的相比 ,胞内蛋白质的质量提高了 3463 % ,FPA 酶活降 低了 22 22 % ,CMCase 酶活降低了 3865 % ,而胞外蛋白质的质量、FPA 酶活和 CMCase 酶活分别提高了 1775 % 、 6008 %和 21 17 % 。压力脉动固态发酵 5d 的微生物胞外蛋白质的酶活 ,与静态固态发酵 6 d 的相当 ,发酵周期缩 短。压力脉动外界周期刺激使蛋白质组分有所变化 ,减少了分子量约为 80400 的组分 ,但增加了分子量约为 28520 的组分。 关键词 : 压力脉动 ; 固态发酵微生物; 蛋白质 中图分类号: TQ93 　　固态发酵是一种古老的发酵方式。对固态发酵 的研究[1 ] ,主要集中在发酵反应器的改进、发酵微 1 　材料与方法 生物的生长代谢以及发酵过程的参数控制这几个方 11 　材料 面 ,但是从分子水平探讨固态发酵微生物的作用机 将绿色木霉 Ⅲ号移接在 10 %麸皮的斜面[3 ] 。 理的研究还未见报道。 种子液为 Mandels 盐[3 ] ,含 1 %麸皮和 015 % 基于改进固态发酵技术的压力脉动固态发酵反 蛋白胨。30 ℃,150 r/ min 培养 2 d 。 应器 ,通过反应器内空气的压力脉动改善了发酵过 固态发酵培养基含 4 g 汽爆麦草[4 ] 、1 g 麸皮和 程中的传热和传质 ,使固态发酵技术进入一个新的 ( ( ) 125 mL 液体营养盐 15 % N H4 2 SO4 、06 % Mg 阶段。该反应器中空气的脉动使微生物的外界环境 SO ·7H O 和 03 % KH PO ) 。121 ℃下灭菌 30 4 2 2 4 形成了一个复杂的周期刺激源 ,对微生物的生长和 min 。接种3 mL 种子液 ,拌匀 ,分别在 30 ℃恒温培 代谢等方面产生了积极影响[2 ] 。在本文中 ,成分复 养箱中常规静态固态发酵和反应器中压力脉动周期 杂的固态发酵微生物里的蛋白质被提取和纯化 ,从 刺激固态发酵[5