原子力显微镜观察虫草多糖分子的结构形貌.pdfVIP

第 18 卷 第 1 期 电　子　显　微　学　报 Vol- 18, No1 1999 年 2 月 Journa l of Ch in ese E lectron M icro scopy Soc iety 1999- 02 文章编号: 1999) 0 10 103105 原子力显微镜观察虫草多糖分子的结构形貌 蔡林涛　李　萍 　陆祖宏 ( 东南大学分子与生物分子电子学开放研究实验室, 南京 2 10096) ( 中国医科大学生药学教研室, 南京 2 10009) 摘　要: 本文通过原子力显微镜直接观察虫草多糖分子的三维结构形貌。虫草多糖分子的稀溶液铺 展在N i2+ 处理的云母片上, 经干燥, 乙醇固定后, 获得稳定、重复的图像。结果表明虫草多糖分子具有 高度分枝的结构, 并且糖链间形成小环或螺旋结构。 关键词: 虫草; 多糖分子; 生物样品; 原子力显微镜 分类号: TH 742 9; Q 949327 8; O 62912; Q 336　　文献标识码: A 原子力显微镜( ) [ 1 ] 是观察物质表面细微形貌和表面加工的强有力工具。它在生物形态 A FM 学[2—3 ] 上的应用引起了人们广泛的关注。由于生物样品或大分子表面往往很脆弱且易被扫描针 尖破坏, 为获得重现性好、分辨率高的图像, 必须改进制样方法和减小针尖和样品间的相互作用 力, 采用轻敲(T app in g M o de) 模式或在液体池中成像, 有助于提高图像质量。 [4 ] 多糖是一种很重要的生物大分子, 目前, 采用A FM 对多糖分子 的研究, 还远远落后于核 酸分子( ) 、蛋白质和磷脂生物膜等生物材料。多糖在体内不仅参与能量的储存和传递, 而且 DN A 也作为细胞骨架材料和参与细胞识别等多种生命功能活动。 本研究通过改进制样方法, 采用A FM 的轻敲模式, 观察从中华医药瑰宝虫草中提取出来的 多糖分子的形貌结构, 获得了清晰、稳定的图像。为进一步研究其立体结构及其构效关系, 以及在 分子水平上阐述虫草多糖分子的药效和作用机制作准备。 材料与方法 1 虫草多糖的分离和纯化　虫草菌体培养液经浓缩后, 去除残渣, 乙醇沉淀, 脱蛋白、脱色, 透 析、浓缩、醇沉, 得粗多糖。经乙醇分级沉淀, 柱层析, 梯度洗脱后, 得白色粉末HDBW 和浅黄色粉 末HBBL 。 ( ) 2 制样　把经纯化后的多糖 1 溶于去离子蒸馏水中, 在通 2 的密封管中 85 ℃加热 1 , m g m l N h 冷至室温; 再稀释, 加热溶解, 冷却, 直至样品浓度为 00 1 。通过加热使样品溶解完全且减 m g m l 少大聚集体的存在。取2 溶液 5 滴在新鲜解理的云母片上, 保持 1 后水洗, 干 mm o l L N iC l2 l m in ( ) 2+ 燥, 使云母表面带正电; 取 5 多糖溶液 00 1 多糖+ 01