南蛇藤总萜对MGC-803细胞侵袭和迁移能力的影响.pdfVIP

CCAC 一373一 2012首届全国中医肿瘤高峰论坛 鉴定为卫矛科南蛇藤属植物。南蛇藤总萜类化合物的 迁移实验不铺Matrigel，其余步骤同侵袭实验。 提取和鉴定由课题合作方中国药科大学王强教授课题 2．4western 组完成怕。。药物提取的主要流程如下：将南蛇藤藤茎 达 切断，粉碎成粉，烘干，95％乙醇回流提取3次，旋 取对数期的MGC一803细胞等数目接种于①gcm 转蒸发仪回收溶剂得到浸膏，拌入硅藻土，真空低温 细胞培养皿，培养过夜待其贴壁后，加入含南蛇藤总 u 抽干，再用乙酸乙酯热水浴加热回流，过滤，回收得 萜(浓度分别为20、40、80g／mL)的细胞培养液， 到乙酸乙酯浸膏(总萜类化合物含量68．3％)，提I叹物另设阴性对照组和阳性对照组，24h后提取细胞总蛋 得率约2％。药物经二甲基亚砜助溶，以无血清培养基 配成实验所需要浓度工作液，常压过滤除菌。5一氟尿 蛋白质电转移到PVDF膜，封闭液室温封闭2h，加入 嘧啶注射液(5一Fu)购自上海旭东海普药业有限：公司 (批号：090724)。 5000)孵育2h，采用化学发光法曝光胶片，冲洗显 1．2细胞株和试剂 色检测相应蛋白条带。 3 人胃癌细胞株MGC一803购于中国科学院上海细胞 结 果 库。RPMll640细胞培养基购自Gibco公司；胎牛血清3．1南蛇藤总萜抑制MGC一803细胞增殖 购自Hyclone公司；胰蛋白酶、MTT粉剂、Matrigel u h 购自sigma公司；Transwell小室为corning公司产生长活跃，经20～320g／mL的南蛇藤总萜处理24 和48 品。删P一2和删P一9单克隆抗体购自Millipore公司，h后，细胞的生长呈现不同程度的抑制，并且呈 B—actin购自cellsignaling公司，HRP标记的羊抗一定的浓度及时间依赖性。与阴性对照组相比，具有 兔IgG购自Bioworld公司。 细胞增殖的抑制率，计算南蛇藤总萜的半数抑制浓度 2方法 (50％concentrationofinhibition，IC50)为 108．94ug／mL。为排除药物的细胞毒作用对细胞侵袭 2．1MTT法检测细胞活力 和迁移能力的影响，后继实验选用的南蛇藤总萜浓度 u 取对数生长期MGC一803细胞消化后，制成单细胞为20、40、80g／mL。 悬液(5×104个／mL)，接种于96孔培养板中，每孔3．2南蛇藤总萜对MGc一803细胞侵袭力的影响 100uL。分别设南蛇藤总萜组(浓度分别为20、40、 80、160、320ug／ⅢL)、阴性对照组(加入等量的组、阴性对照组和阳性对照组MGc一803细胞的侵袭力， 32u RPMll640培养液)和阳性对照组(加入5一Fu结果如表2所示：(附下)。南蛇藤总萜作用后，明显 u g／mL)。细胞接种24h后，每孔加入100L含药培 降低了MGC一803细胞的侵袭力。 养液或相应对照液，继续孵育培养24h和4811后， 3．3南蛇藤总萜对MGc一803细胞迁移力的影响 按常规方法进行MTT反应