蛋白质组学研究前沿和主要技术方法.pdfVIP

( ) 生物学教学 2005年 第 30卷 第 5 期 ·3 · 蛋白质组学研究前沿及主要技术方法 基因有限公司专家组 　(基因有限公司上海区　200233) 　　基因组中的几乎所有基因最终是通过蛋白质的表 不同类型的细胞都表达成千上万种蛋白质 ,而一 达 、修饰和相互作用来实现其功能的, 因此对蛋白质的 次实验同时分析这么多种蛋白质是很困难的。现有的 分析历来是生命科学研究中很重要的内容 。随着多种 技术如二维电泳在一次电泳中也只能把两到三千种蛋 生物的基因组计划的实施和完成 , 蛋白质研究技术的 白质进行比较有效的分离 , 因此蛋白质成份越复杂 ,种 发展和突破以及生物信息学的发展 ,人们开展了大规 类越多越无助于问题的解决 。因此在实验中,减少蛋 模的蛋白质分析 ,蛋白质组学随之产生 。一般认为 ,蛋 白质种类和复杂程度 ,可以使结果更加客观真实 。我 白质组学的一个很重要的内容应该是筛选出参与一个 们可以在蛋白质样品的制备上考虑解决这个问题 ,如 ( ) 生命过程 生理过程或病理过程 的全部蛋 白质种类 分别制备胞质蛋白, 膜蛋白,核蛋白,骨架蛋 白, 线粒 及其后修饰和相互作用 。为此 ,需要借助一些高通量 , 体蛋白, 内质网蛋白等 ,也可以根据蛋白质的溶解性质 快速 ,准确 , 自动化程度高的技术和手段 。当然 ,任何 制备 ,如将最可溶性蛋白质 , 中等程度可溶性蛋白质 , 新技术和手段都在发展完善中,也存在一定的局限 , 因 高度不可溶蛋白质 ,最不可溶性蛋白质分别制备 ,或者 ( 此需要对实验结果要进行严格的分析 ,并借助多种技 可以分别制备磷酸化蛋白质或糖基化蛋白质 Q iagen ) 术手段对同一研究内容进行验证和比较 ,去伪存真 ,得 和 Genom ic Solution 公司有相应试剂盒 。而 Genom ic 出符合客观的结论 。我们在强调这方面重要性的同 Solution 公司也有除去 白蛋白的试剂盒以便减少杂蛋 时 ,应该也注意到 ,常规的传统的技术手段如免疫组织 白质对二维电泳等操作的影响。CST等公司也提供多 化学在蛋白质组学研究中同样魅力不减当年 。 种特异性抗体 ,分别识别不同种蛋白质的磷酸化形式 , 直到现在 ,很多蛋白质组学研究的起始可能就存 结合 L I COR 公司的近红外荧光染料标记第二抗体的 在问题 , 因此导致实验结果无法很好地解释 ,研究结论 技术 ,我们就可以在同一张 W e stern膜上在一次实验中 偏差甚至错误 ,而实验的重复性也很差 。这个问题的 同时检测一种蛋白质的表达水平和磷酸化水平 。需要 根源或许就是在于我们可能忽视了一些最基本的方面 补充的是 , 目前也有直接显示凝胶中磷酸化蛋白或糖 如研究材料的获得 。利用培养的细胞进行的工作可能 基化蛋白的凝胶染色技术 。 还不至于如此 。我们主要指利用动物进行的研究。一 蛋白质表达和 mRNA 表达具有一定的相关性 , 因 些基本的问题是不能忽视的,如利用遗传背景 、性别 、 此 mRNA 表达和蛋白质表达可以在一定程度上进行互 年龄 、饲养条件和环境等尽量一致