Bt杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化的研究.pdfVIP

氨基酸和生物资源 　2008, 30 ( 3) : 5 ～10 Am ino A cids B iotic R esou rces B t杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化研究 何 　伟 ,王中康 ,陈金华 ,李 　强 ,曹月青 ,殷幼平 (重庆大学生物工程学院 ,重庆市功能基因及调控技术重点实验室 , 重庆市杀虫真菌农药工程技术中心 ,重庆 400030) ( ) 摘要 :桑粒肩天牛 Ap riona g erm a ri Hop e, A g 幼虫是一种营钻蛀性生活的重要林业害虫 ,通过传统纯培养 、生理生化鉴定 ( 和 16SrDNA 分子生物学分析等方法分离 、鉴定出其肠道优势内生菌溶血葡萄球菌 S tap hy lococcus haem oly ticus, S. haem oly tic ) ( ) us A g06菌株和人葡萄球菌 S tap hy lococcus hom is A g08菌株 。从中筛选菌株 S. haem oly ticus A g06进行质粒消除后作为出发菌 株 ,利用电转化技术将含有对鞘翅 目昆虫具专一性毒力 B t杀虫基因 cry3A 的 Escherich ia coli - B acillus thu ring iensis 穿梭表达 质粒 pH T305a和 pH T79 11分别转入其中。经质粒稳定性试验 、转化子生长特性测试等分析 ,结果显示 cry3A 基因已经成功转 入 A g幼虫的优势内生菌溶血葡萄球菌中。 关键词 :桑粒肩天牛幼虫 ;肠道内生优势菌 ; B t杀虫基因; cry 3A ;转化 中图分类号 : Q939. 9 文献标识码 : A 文章编号 : 1006 - 8376 (2008) 03 - 0005 - 06 　　天牛是鞘翅 目昆虫中较大的一个类群 ,其幼虫 而国内的一些学者也利用电转化技术将外源的苏云 ( ) δ 大多以树木的纤维材料为食 ,林木 、果树 、桑 、茶 、棉 、 金芽孢杆菌 B acillus thu ring iens is - 内毒素基因转 ( ) [ 4 ] 木建材料 、家具等都可以受到天牛的危害 。由于天 入野生巨大芽孢杆菌 B acillu sm eg a terium 等植 牛幼虫营钻蛀性生活 ,生活隐蔽 ,活动期长 ,所以防 物内生菌中构建抗虫内生工程菌在植物体内表达杀 治工作难度很大 。目前的主要防治方法仍是以传统 虫伴孢晶体蛋白防治害虫的新方法 , 已逐渐成为近 的人工钩杀幼虫 、砸卵 、堵洞和化学药剂防治等方法 年来生物农药研究领域的热点 。但这类工程菌是在 为主 。其中人工防治费时、费工 ,不适用于规模化生 植物体内表达毒素 ,被昆虫取食后才起杀虫作用 ,而 产 ;利用化学防治药剂防治由于药剂有效期短 ,不易 非菌体直接进入昆虫体内杀虫 , 因此其在害虫体内 达到虫体 ,而且容易导致害虫抗药性增强以及具有