WTp53基因联合TKGCV、CD5Fc系统治疗人结肠癌的实验的研究.pdfVIP

·基础研究·FundamentalResearch· WTp5 肠癌的实验研究 魏冬1 何庆泗1 吴 雪2 谭 伟3 牛洪欣1 山东大学1齐鲁医院普外科2护理学院 (山东 济南 250012) 3山东省济南市中心医院普外科 (山东 济南 2500i0) [基金项目]山东省自然科学基金资助项目(26010105200356) 342 魏冬，等．WTp53基因联合TK／GCV、CD／5一Fc系统治疗人结肠癌的实验研究 攀喽攀骥辫骥愿謦攀紫缨塑羹爹’固馨夔鬻I餮紫缓潮鬻囊篓攀。簿壤§篓蘩i褥矮 t鬻◇◇i§甍黪◇|黪◇爨謦；锈攀◇鬻蠖黪纂4赣；骥繁§◇饕《》警l憩黪|餐麓穆静◇鹗《囊赣|黎哟l豢》黎渗i 一纛瓣l溪囊熊戆《壤赣|鬃囔鬻@豢懒灏赣赣磷犊躐囊酾《整◇畿I獭蛰黛舔i鹱◇◇j冁◇鼷瓣?i鬻鼗醺鬻◇舔辫{|；I ；蝴鬟囊≤≤鬻鸱t固囊豢醺謦∈j!}鬻嗣菱鬟懑p。I溪≤自§黪躲疆鬻夔纂蒯鬟黪黪遭芦6鞠；《≤獯。th醺鬻瓣e谬鳆然}丝≥霪；§§霸cfj篓鍪篓蘩||：℃鹱 j獭◇§穆獭§麓镳瞩熬辫|糕澜|_繁赫◇◇《嘲◇◇|然l镑蝴戮矮t熬哆l獭黪黛爨镰囔 i囊鸱鏊◇灏l餐黼粪黪灏霉鹇蘩霪黪矮④鹬◇獭◇懑§黛|镶鼷谶魄l瀚翻|鹣舔鬣舔褥蹶豢唆|@瀚鞲舔霉鬻谶I曦蘩◇簿餮萋 鏊嘲蘩灏的攥媾蠢赫渤潦鬻涨蠢蠢囊囊。-灞弑l_3戮露秘∞蘩羹|i|||囊貉i鳓》蘩麟§曦醺霹酾。自簧蓊巍奠蜀《簿鞠ig：骥 i辫麟麟篱蝴馔戳灏戮鬣黼麓醺鬻鏊謦@镳；豢蠛蛰镳篱蘩畿獭鬟蠹鬻r嚣琵自鬣甍l誊琵鬣筏il*棼疆鬻熊臻t疆琵j篱蘩魏篱i餮j鬻霉萋§* 联合基因治疗已成为肿瘤治疗的新方向，为此，我们建 1．4统计学处理采用方差分析处理实验数据，采用最小 立裸鼠人结肠癌移植瘤模型，通过实验观察WTp53(Wild显著差(LsD)f检验进行每两组间差异显著性的检验，采用 type 2x p53)基因联合TK／GCV(胸苷激酶／丙氧鸟苷)、CD／5一 Fc(胞嘧啶脱氨酶／5氟胞嘧啶)系统治疗结肠癌的效果，探存在交互协同作用。统计处理应用SPSSll．0统计软件包。 讨其用于结肠癌基因治疗的可能性，报告如下。 2结果 1材料与方法 2．1 小鼠的生存状况及肿瘤生长情况对照组裸鼠移植瘤 1．1 裸鼠结肠癌移植瘤模型的建立 采用培养细胞移植 实验过程中部分出现表面坏死、破溃感染，后期裸小鼠有恶 法[1]，应用上海生物细胞研究所建立的人结肠癌细胞系 病质表现；治疗组治疗过程中移植瘤表面光滑完整，裸小鼠无 SW480，于RPMI一1640含新生牛血清和双抗的培养液中，恶病质表现，一般情况、食欲、精神状态及皮肤反应均无改变。 37℃恒温孵育，获得生长达80％汇合的SW480细胞，收集2．2肿瘤体积各组肿瘤体积生长曲线。见图l。第7周 细胞并制成5×107／ml的细胞悬液，接种于裸鼠(SPE级 BALB／C A—nu品系，4周龄，体重16～209，雌性)背部皮下， 0．2ml／只，待肿瘤长至0．5甜左右时，开始基因治疗。 1．2 分组与给药 将荷瘤裸鼠随机分为4组(每组8只)：① 各组问比较有统计学意义(P0．05)，即各治疗组对抑制肿 第1组(空白对照组)。②第2组(WTp53治疗组)：应用山东瘤的增长均有显著意义，联合基因治疗组效果更强。 大学生物化学与分子生物学研究所提供PCMY-p53质粒。由 脂质体TM2000介导，20“g／只进行瘤内注射，每48小时1 次，共3次。③第3组(TK、CD治疗组)：山东大学齐鲁医院 肿瘤中心实验室提供PA317／TK_cD细胞，采用逆转录病毒 介导，1×109PFU瘤内注射，每天1次，连续3d；注射后48h， 开始腹腔注射GCV 500 100mg／(kg·d)，5-Fcmg／(kg·d)， 连续10d。④第4组(联合基因治疗组)：WTp53及TK、CD 注射，各基因治疗方法同第2，3组。 1．3疗效观察(1)每天观察小鼠的生存状况及肿瘤生长 情况。(2)肿瘤体积：基因治疗开始后记为第1周，用游标卡 尺每周测量肿瘤的长径L，短径R，按V一1／2(LR2)计算肿 瘤体积，连续7周。并根据体积绘制各组肿瘤生长曲线。 (3)肿瘤生长抑制率：E--(对照组平均肿瘤体积增长数一