大鼠同种异体肝移植急性排异反应的蛋白质组学的研究.pdfVIP

中国科学 C 辑:生命科学 2007 年 第37 卷 第1 期: 88~95 SCIENCE IN CHINA PRESS 大鼠同种异体肝移植急性排异反应的 蛋白质组学研究 ①②† ②③† ② ② ①* 张春潮 朱 峰 尉建锋 郑树森 李兰娟 (① 浙江大学医学院附属第一医院传染科, 杭州 310003; ② 浙江大学医学院附属第一医院外科研究所卫生部多 器官联合移植研究重点实验室, 杭州 310003; ③ 苏州大学附属第三医院肝胆外科, 常州 213003) 摘要 为更好的理解原位肝移植免疫排异反应的分子机理, 分别建立了大鼠同种异体肝移植 的动物模型作为急性排异组和大鼠同基因移植的动物模型作为非排异对照组. 利用荧光差异显 示双向凝胶电泳并整合内标法与正、反相荧光标记, 对急性排异组和对照组大鼠肝移植后的肝组 织蛋白质表达谱进行了定量蛋白质组学研究. 结果表明, 有 27 个蛋白点的表达水平在急性排异 组有显著差异, 其中 13 个蛋白点表达水平上调, 与对照组相比比值变化超过 1.5 倍以上, 而 14 , 1.5 . 19 , 个蛋白点表达水平下调 其相应比值变化超过至少 倍以上 个差异表达蛋白经胶内酶切后 利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱获得相应的肽指纹图谱并结合数据库搜索得到鉴定. 这些差异蛋白的分子功能主要表现为氧化还原活性及离子结合活性. 实验结果将有助于进一步 了解器官移植排异反应的分子机理. 关键词 蛋白质组学 荧光差异显示双向凝胶电泳 同种异体排异 肝移植 原位肝移植是目前治疗包括肝硬化、酒精肝及 排异反应相关生物标记物的发现等领域[11]. 利用双向 原发性肝癌等终末期肝病最有效的方法[1~5]. 虽然不 电泳与质谱技术, Pan 等人[12,13]分析了大鼠原位肝移 断提高的外科技术与免疫抑制剂的使用有效提高了移 植自发性免疫耐受现象并发现了与之相关的一些生 植的成功率, 但移植排异反应仍然是目前临床面临的 物标记物. Clarke 等人[14]将尿液蛋白质组学研究应用 一个主要问题, 特别是手术结束后的前几个星期排异 于肾移植领域, 并把它发展为一种急性肾移植排异的 [6~8] , 反应发生的可能性仍然很大 . 荧光差异显示双向 诊断方法 显示出这一技术应用于器官移植领域的有 凝胶电泳是蛋白质组学与代谢组学研究的核心技术, 效前景. 本文利用荧光差异显示双向凝胶电泳并结合 这一技术能够使我们在同一块凝胶上实现不同样本 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术, 报道大鼠 蛋白差异表达水平的比较, 从而提供疾病相关的新的 肝移植急性排异反应全细胞蛋白质组学研究. 生物标记物信息、疾病相关靶点、疾病发病机理与过 1 材料与方法 程等有用信息. 因此, 已被广泛应用到癌症以及其它 重要疾病的研究[9,10] . 近几年, 蛋白质组学与代谢组 1.1 实验设计与手术方案 学开始被应用到器官移植的同种异体排异反应以及 本实验所用大