基因敲除动物模型建立.pdfVIP

徐州医学院学报 　ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　XUZHOU 　2002 ,22 ( 1) ·9 1 · 基因敲除动物模型的建立 朱孝荣 ,薛 　猛 (扬州大学比较医学中心 ,江苏 扬州 225009) ( ) 　　摘要 :随着基因敲除和胚胎干细胞 ES 细胞 技术的发展 ,在生命科学的许多领域都已建立了基因敲除动物 模型 。基因敲除动物模型的建立主要是用 ES 细胞作为材料 ,通过外源基因同源重组技术将 ES 细胞中某段基因 置换出来 ,然后将此 ES 细胞注入囊胚中形成嵌合体 ,再通过杂交使外源基因纯合 。同源重组法应用比较广泛但 存在不足 ,主要是有些被敲除的基因对动物的胚胎发育至关重要 ,基因敲除后容易导致胚胎早期死亡 。Cre/ loxP 基因定点敲除系统可解决这些问题 ,它可以在特定的时间内对特定组织中的基因进行敲除 。基因敲除动物模型 在免疫学 、人类疾病模型复制和基因功能鉴定等方面都有着广泛的应用 。 关键词 :ES 细胞 ;基因敲除 ;动物模型 ( ) 中图分类号 :Q812 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000 - 2065 2002 01 - 0091 - 04 ( 　　基因敲除技术是在基因定位整合技术 gene tar 到假孕鼠的子宫内,发育成一个嵌合体 。经过进一 ) ( geting 以及小鼠胚胎干细胞 embryonicstem cells , ES 步杂交传代的方法 ,使外源基因纯合 ,即建立成基因 ) 细胞 体外培养的基础上建立的一种新兴的生物技 敲除动物模型 。虽然线路并不复杂 ,但 由于真核细 术 。该技术使转基因技术更前进了一步 ,为人们在 胞内发生同源重组的概率非常低 ,筛选被整合的细 动物体内分析某一特定的基因提供了有力的手段 , 胞就成了关键的问题 。为了提高同源重组效率 ,减 这一最新技术最先用于动物模型的复制上 , 1988 年 少后阶段的工作 ,人们找到几种方法 ,其中最常用的 ( ) 人类培育了第 1 例基因敲除动物模型 ,揭开了基因 方法是正负双向选择法 PNS 、正向选择法和 PCR 敲除动物模型建立的序幕 。进入 20 世纪 90 年代 , 法 。PNS 法 ,所设计的载体包含 10～15 kb 与靶基因 生命科学的各个领域 、各个学科基因敲除动物模型 同源的片断 ,一个 neor 基因插入到载体同源序列内 都得到广泛的应用 。 的一个外显子中部 ,作为正选择标记 ;在同源区外插 入一个 HSV - tk 基因作为负选择标记 。载体中插入 1 　基因敲除动物模型的建立 neor 基因的主要 目的是打断靶基因的编码序列 ,整 　　基因敲除目前最常使用的是小鼠的 ES 细胞[ 1] , 合重组细胞的一个选择标记 。因 neor 基因对 G4 18 ( ) 主要是因为 ES 细胞在体外有白血病抑制因子 L IF 耐受而