基质金属蛋白酶7的基因克隆与原核表达.pdfVIP

安徽农学通报，AnhuiA ．Sci．Bul1．2013，19(07) 31 基质金属蛋白酶一7的基因克隆和原核表达 刘继科 曹福祥 郭 川 彭继庆 冯延芝 (中南林业科技大学，湖南长沙 410004) 摘 要 ：研究构建人基质金属蛋白酶7(MMP一7)的原核表达载体，并进行原核表达获得重组蛋白MMP一7。以人肾 肿瘤组织总RNA为模板，PCR方法获得MMP一7成熟蛋白的基因序列，构建含 10xhis标签的原核表达载体，转化大 肠杆菌BL21(DE3)，并经异丙基一8一D一硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达，获得重组蛋 白，并经十二烷基磺酸钠一 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)，检测其表达情况。最终得到pET24a(+)～MMP一7—10his重组质粒，诱导表达后 重组蛋 白占总蛋白的41％左右，获得21．2kD大小蛋 白，与 目的蛋白大小一致 ，纯度大于90％，为进一步研 究奠定 基础。 关键词：基质金属蛋白酶-7；基因克隆；原核表达 中图分类号 Q55 文献标识码 A 文章编号 1007—7731(2013)07-3卜04 CloningandProkaryotieExpressionofHumanMM P_-7 LiuJikeeta1． (CentralSouthUniversityofForestryandTechnology，Changsha410004，China) Abstract：Toobtaintherecombinantmatrixmetalloproteinase7 (MMP-7)，thisarticleusingtheprokaryoticex— pression and constructing the prokaryotic expression vector．The totalRNA ofhuman kidney tumor tissue was usedasatemplateforreverse transcription，afterPCR amplification，the targetfragmentwasdigestedand cloned into theprokaryoticexpression vectorpET24a(+)to consturcttherecombinantplasmidpET24a(+)一MMP一7— 10his。thentherecombinantplasmidwastransferredintoBL21(DE3)andtheMMP-7expressionwasinducedby IPTG and examined by SDS—PAGE．We obtained the recombinantplasmid ofhuman MMP一7 gene．The ex— pressed MMP-7 recombinantprotein accounted ofrapproximately 41％ ofthetotalbacteria proteins．and the purl- ty ofMMP一7wasabove90％ ． Keywords：MMP-7；Cloning；Prokaryotic expression 基质金属蛋白酶 (matrixmetallopr0teinases，MMPs)是一 1．1．1 菌种与质粒 载体pET24a(+)，菌株E．coliDH5a和 类依赖zn的参与ECM降解的蛋白水解酶，可降解基底膜和 BL21(DE3)均为本实验室保存。 细胞外基质 (extraeellarmatrix，ECM)的大多数蛋白质 ，并参 1．1．2 主要试剂 人 肾肿瘤组织总RNA购 自Biochain，内 与调节ECM动态平衡 ，是维持ECM稳态最重要的一类酶 ，其 切酶NdeI、BamH I、T4DNA连接酶 、TaqDNA聚合酶以 与机体许多病理过程密切相关”～。在血管形成、炎症、风湿 及T载体pMD18一Tsimple购 自Ta