贵州地区深部感染常见致病性真菌基因分析.pdfVIP

贵州地区深部感染常见致病性真菌的基因分析 罗振华王和王丹霓康颖倩 阳市云岩区乖H支基金(云科技合同字【2008】第1-7号)、贵州省卫生厅科技基金(G2008—7)； 贵州省教育厅科技基金(F2009-2)) SrDNA之间以及5．8SrDNA和28SrDNA之问 ITS是位于真茼染色体上18SrDNA和5．8 的核糖体内转录区序列，相同菌种的ITS区序列具有大于99％相似性，近年来国内外广泛应用 于真菌的基因鉴定、分类及其流行病学调查与研究n划。白假丝酵母菌为常见的条件致病性真 rDNA 菌，可根据白假丝酵母菌是否具有25 I型内含子以及片段大小对其进行基因分型，不同 基因型在引起感染的分布、抗真菌药物敏感性等方面可存在着差异懵’。为了解贵州地区深部感 rDNA 染患者常见致病性真菌基因特点及其分布，本文采用检测ITS序列和25I型内含子序列 方法，对深部感染标本内分离致病性真菌进行了基因研究与分析，现将结果报告如下。 材料与方法 1．标本与真菌来源：2007年1月至2009年1月期问分别在贵州省内贵阳市、安顺市、凯 里市、兴义市的二级或三级医院收集242例住院或门诊患者的下呼吸道分泌物、粪便、阴道 分泌物、尿液、前列腺液或精液标本。各部位标本按文献H1方法接种至CHROMager琼脂(法 Paris 国CHROMagarFrance公司)及PDA琼脂(日本和光纯药工业株式会社)培养基分离培 养和形态与生物学鉴定，获得致病性真菌261株。 DNAextraction 2．真菌DNA的提取：用fungus isoplant试剂盒(日本和光纯药工业) 及其方法处理和分离提取真菌的DNA。 3．ITS序列检测：参考文献[5]用引物ITS5 5’一TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ sequence ITS序列。PCR产物送北京三博远志生物技术有限公司做序列测定，结果用CLC 据99％以上符合率鉴定菌种。 4．25SrDNA I型内含子序列鉴定：选择ITS鉴定为白假丝酵母菌的菌株，参考文献¨1用 引物CA-INT-L5’-ATAAGGG从GTcGGCAAA^1AGATCCGT从一3’和cA—INT-R rDNA rDNA I型内含子区。PCR产物对照25SI型内含子基因型阳性菌株的电泳图谱，识别 白假丝酵母菌的基因类型。 结果 1．致病性真菌的ITS鉴定：分离的261株真菌中，含酵母菌246株，占94．3％：霉菌15 株，占5．7％。其中分离菌株中白假丝酵母茼占绝大多数(表1)。 表1 242例深部感染患者分离致病性真菌的ITS鉴定结果 菌种名称数量(株)检出率(_)菌种名称数量(株)检出率(’)菌种名称 数量(株)捡出率() 白假丝酵母菌 155 59．3 近皱摺假丝酵母菌l 0．4 黄曲霉 1 0．4 光滑假丝酵母菌 33 l互6 平常假丝酵母菌 l 0．4 产黄曲霉 l 0．4 热带假丝酵母菌 16 6．1 问型假丝酵母菌 l 0．4 米曲霉 l 0．4 克柔假丝酵母菌 14 5．3 链状假丝酵母菌 l o．4 杂色曲霉 I o．4 278 8 3。 2 。8 “。“4 。4 4。：18”41 )””8“”4“ m十*目＆日≈*7 2 7 l*目H日*