海洋多管藻R-藻红蛋白作为肿瘤光动力治疗光敏剂.pdfVIP

海洋多管藻R一藻红蛋白作为肿瘤 光动力治疗的光敏剂 王广策1李冠武2陆雷2李振刚2曾呈奎1 (1中国科学院海洋研究所2中国科技大学生物系) 摘要从多管藻中分离R-藻红蛋白，将其添加至体外培养的小鼠S180肿瘤细胞的培养液中，用氩离子激光辐 照，研究其对肿瘤细胞的光敏杀伤作用。研究发现，固定激光的累积能量时，肿瘤细胞的存活率与培养液中藻红蛋 白浓度呈负相关，并得到相应的拟合曲线；固定培养液中藻红蛋白的浓度，用不同累积能量的激光辐照，发现细胞 的存活率差异无显著意义。研究结果表明，海洋多管藻R一藻红蛋白有望成为肿瘤光动力治疗中高效价廉的光敏 剂。 关键词R_藻红蛋白小鼠S180细胞光敏作用 肿瘤细胞的光动力治疗法是近年发展起来的一种新方法。国内外不少肿瘤医疗中心已对多种肿瘤采用 这种方法进行治疗，效果明显，因而日益受到人们的重视。目前，常用的光敏剂是从全血中分离的血卟啉衍 生物，它价格昂贵，毒副作用大，因而限制了肿瘤光动力治疗方法的广泛应用。 藻胆蛋白是存在于蓝藻、红藻、隐藻和一些甲藻中的水溶性色蛋白，它是由脱辅基蛋白和开链四吡咯结 构的色基通过硫醚键共价交联而成。分离的藻胆蛋白有极高的荧光量子产率(O．98)，而且分离纯化简单方 便L1 的存活率仅为15％【2J。蔡心涵等13J用藻蓝蛋白处理二种癌细胞作体内外激光治疗试验发现，用藻蓝蛋白处 理体外培养的人大肠癌细胞株，经铜激光辐射，可以有效地杀死癌细胞；在体内，处理带癌小鼠，再用激光辐 照，也可以有效地杀死肿瘤组织，而且无毒、副作用，这些均表明它是一种有效的光敏剂。然而藻蓝蛋白是一 种高分子量的寡聚体蛋白，用它作为肿瘤光动力治疗的光敏剂时尚没有发现一种有效的给药方法，用口服会 被消化，用注射法会引起强烈的过敏反应。 红胆素和藻尿胆素，而且这些藻胆色素与天然藻胆蛋白相似，具有极高的荧光量子产额【4J。这表明藻红蛋白 经海兔消化道消化后，其四毗咯结构的藻胆色素的光谱特性并未受到破坏，而且在正常组织细胞内的潴留时 间短。因此，以藻红蛋白作为肿瘤光动力治疗的光敏剂也许可以采用口服的方法解决给药途径问题。本文 报道了以藻红蛋白作为光敏剂对体外培养的肿瘤细胞的光敏杀伤作用。 1材料与方法 1．1材料 (1)多管藻采自青岛汇泉弯。 (2)小鼠S180细胞购自中科院上海细胞生物学研究所。 (3)激光器为美国COHERENT公司生产的INNOVR70型氩离子激光器。 1．2方法 (1)多管藻R．藻红蛋白的分离纯化参考文献111进行。 那霉素)培养至对数生长期时，收集细胞，用无血清培养液洗涤，并稀释至每rnLt06个细胞。接种96孔细胞 x 培养板，每孔加样50止，含细胞5104个。 437 不用激光辐照；④只用不同强度的激光辐照，培养液中不加入藻红蛋白；⑤在培养液中不加入藻红蛋白，也不 使用激光辐照作为空白对照。 h；不含藻红蛋白的实 f4)培养液中含藻红蛋白的处理组先用含藻红蛋白的无血清1640培养液培养4 J，t检 培养24h。各组细胞生存率以与空白对照组细胞数均数比值的百分数表示。MTI法测定各孔细胞数L5 验法判定各组间差别显著性。 2结果 藻红蛋白浓度间关系的拟合曲线为：lgY=0．12529—0X—o．52) 至27％之间，差异无显著意义(Po (3)培养液中含有藻红蛋白但不使用激光辐照组，细胞的存活率随着藻红蛋白浓度的增加而有所下降。 除培养液中含199与10蜡组间比较无显著性差异，其他各组间均差异有显著意义(Po．005)。 (4)培养液中不含藻红蛋白只用激光辐照组与空白对照组相比，细胞存活率有显著性差异，但各组间随 激光能量的增加不表现下降趋势。各组问细胞存活率相差不到10％。 3讨论 差异。尽管在100“∥mL以外的曲线不再能准确地反映细胞存活率与藻红蛋白之间的变化关系，却足以预 示此浓度之后，再增加藻红