环境优先污染物多氯联苯的实时荧光免疫PCR检测方法的研究.pdfVIP

第28卷增刊 分析试验室 V01．28．sIIppl． 20)9往11月 ChinesefJf划wis[|‘qJJoratorv 20()9—11 Journal 环境优先污染物多氯联苯的 实时荧光免疫PCR检测方法研究 庄惠生¨一，陈寒玉2’3 3．河南城建学院环境和市政工程系，平顶山467000) 环境中多氯联苯的检测方法主要有气相色谱、 关系数分别为：0．978，0．961，0．954。对三种多氯 液相色谱和气质联用等色谱分析技术。但色谱技 联苯的检测限分别达到：1．75，1．32，1．5蟛InL。 术需要复杂的前处理技术和昂贵的仪器，对操作 2．建立了直接竞争实时定量免疫聚合酶链式 人员的技术要求也比较高。因此不适于大规模环 反应(直接竞争rt-IPCR)分析方法，用于检测环境 境样品的现场监测和批量监测。免疫分析技术具 中3种PCBs。用制备的包被原包被经过戊二醛处 有方便快捷、检测成本低、灵敏度高等优点，可以 理的PCR小管，接着用PCBs与包被原直接竞争结 满足简单、快速、灵敏检测环境激素的要求。 合生物素化特异性抗体，然后通过亲和素与制备 实时荧光定量免疫PCR是近年来在荧光PCR的生物素化的DNA探针结合，最后通过实时定量 和免疫PCR基础上建立起来的一种免疫检测新技 PcR仪在优化的扩增程序下扩增DNA并实时检 术。此方法建立以来，已经在癌症、自身免疫缺 测。此方法对PCBl2，37，77测定的标准曲线相关 陷、致病菌和细菌毒性等生物学和医学研究领域 得到广泛应用，该技术与传统的ELISA相比，灵敏苯的检测限分别达到：1．53，1．4，1．25 f#mL。 3．建立了抗体包被实时定量免疫聚合酶链式 度提高了100—1000倍，和一般免疫PCR相比，具 有更小的实验室内部误差。因此，本课题组首先 反应(抗体包被rt．脱R)分析方法，用于检测环境 将该技术引入环境科学研究领域，用于环境中多 中3种PCBs。用制备的特异性抗体包被经过戊二 环芳烃的检测【l。3】。本文建立了测定环境优先污 醛处理的PCR小管，接着用PCBa与生物素化半抗 染物多氯联苯的实时荧光定量免疫PCR新方法， 原竞争结合特异性抗体，然后通过亲和素与制备 对环境中多氯联苯的迁移、转化和降解等环境行 的生物素化的DNA探针结合，最后通过实时定量 为的研究提供一种新的检测技术。 PCR仪在优化的扩增程序下扩增DNA并实时检 1．建立了间接竞争实时定量免疫聚合酶链式 测。此方法对PCBl2，37，77测定的标准曲线相关 反应(间接竞争m脱R)分析方法，用于检测环境 中3种PCBs。用制备的包被原包被经过戊二醛处苯的检测限分别达到：1．75，1．45，1．3纠nlL。 理的PCR小管，接着用PCBs与包被原竞争结合特 4．将所研究的新方法应用于实际环境样品中 异性抗体，再利用生物素化二抗与结合在包被原 多氯联苯的检测，各种方法的交叉反应率小于 上的特异性抗体结合，然后通过亲和素与制备的 15％，回收率在85％～110％之间，实际样品的检 测结果与GC／MS法的测定结果相比，具有良好的 生物素化的103bp探针DNA结合，最后通过实时 定量PCR仪在优化的扩增程序下扩增DNA并实时 一致性。 检测。此方法对PCBl2，3