聚乙二醇-聚唾液酸嵌段聚合修饰尿酸酶.pdfVIP

第 13卷第2期 生 物 加 工 过 程 VoI．13No．2 2015年 3月 ChineseJournalofBioprocessEngineering Mar．2015 doi：10．3969／j．issn．1672—3678．2015．02．017 聚乙二醇一聚唾液酸嵌段聚合修饰尿酸酶 卢绍曾，吴剑荣，朱 莉，郑志永，詹晓北 (江南大学 生物工程学院 糖化学与生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122) 摘 要：探索一种综合聚唾液酸(PSA)和聚 乙二醇(PEG)优势的蛋 白修饰方法。对纯化的聚唾液酸进行两步活 化，先在非还原端氧化产生活性醛基 ，再加入胱胺形成活性巯基；活化的聚唾液酸 (相对分子质量为 3．4×10)和异 基双功能的PEG(相对分子质量为3．5×10)形成嵌段聚合物，然后于4℃修饰尿酸酶。利用凝胶层析 (Toyopearl HW一55F)对修饰后的尿酸酶进行纯化，收集相应峰进行化学法和 SDS—PAGE电泳鉴定，经多角度激光光散射凝 胶 系统测定缀合物相对分子质量为 5．214x10；相对于原始酶，修饰酶酶活保留率 72．4％，体外热失活半衰期 由 115．5h提高到231h，对高温、酸碱、胰蛋 白酶的耐受稳定性显著提高。 关键词 ：聚乙二醇 ；聚唾液酸；嵌段聚合 ；尿酸酶 ；缓释 中图分类号：Q55 文献标志码：A 文章编号：1672-3678(2015)02-0086—07 Uricasemodificationwithpolysialicacid and polyethyleneglycol(PEG-PSA)CO-polymer LU Shaozeng，WU Jianrong，ZHULi，ZHENGZhiyong，ZHAN Xiaobei (KeyLabroratoryofCarboh3rdrateChemistry＆BintechnologyoftheMinistryofEducation，SchoolofBioteehnology， JiangnanUniversity，Wuxi214122，China) Abstract：A novelproteinmodificationmethodwasdevelopedbyintegratingtheadvantagesofpolysialic acid(PSA)andpolyethyleneglycol(PEG)．PSAwasactivatedbytwosteps：thealdehydegroupwas generatedbyperiodateoxidation atthenon—reducing end，and then theactive thin1groupwasformed usingcystamine．TheactivatedPSA(3．4x10)reactedwithhetero—bifunctionalPEG(3．5x10)toform ablockCO—polymer，andmodifiedurieaseat4oC．Theconjugatewaspurifiedwithgelpermeation chromatographyandthetargetpeakwascollectedandidentifiedwithchemicalmethodandSDS—PAGE． Themolecularweightoftheconjugatewas5．214×10 throughmulti—anglelaserlightscatteringgel system．Comparedwithnativeenzyme．residualenzymeactivitywas72．4％ ，andheatinactivationhalflife invitrowasimproved from 115．5h upto231h．Thetolerancestabi