精氨酸激酶基因的蛋白表达和实时荧光定量分析.pdfVIP

第 31卷 第 1期 石河子大学学报 (自然科学版) Vo1．31 NO．1 2013年 2月 JournalofShiheziUniversity(NaturalScience) Feb．2Ol3 文章编号 ：1007—7383(2013)O1—0006—04 精氨酸激酶基 因的蛋白表达及实时荧光定量分析 赵伊英，武万峰，汪小东，张建华 (石河子大学农学院，石河子 832003) 摘要：为构建棉铃虫精氨酸激酶基因(AK)的原核表达系统及确定 2种不同品系的棉铃虫体 内AK的表达量差异， 以pET一28a质粒为表达载体 ，将 AK基因重组转化至大肠杆菌 BI2l中进行原核表达 。采用 SDS电泳及实 时荧光PCR定量分析 。结果表 明：经IPTG诱导AK基因在大肠杆菌 BI21得到表达 ，表达 的融合蛋 白其分子量与 预测结果一致；石河子地区田间品系棉铃虫体 内AK基因的表达量远远大于敏感品系棉铃虫体 内AK基因的表达 量为 77．36％，表 明石河子 田问品系棉铃虫的生命代谢活动 的能力要强于敏感品系 。 关键词：精氨酸激酶；棉铃虫 ；原核表达；实时荧光PCR 中图分类号 ：s433．4 文献标志码 ：A ProteinExpressionofArginineKinaseandReal_TimePCR Analysis ZHAO Yiying，WU Wanfeng，WANG Xiaodong，ZHANGJianhua (CollegeofAgriculture，ShiheziUniversity，Shihezi832003，China) Abstract：InordertoconstructprokaryoticexpressionvectoranddetermineAK expressionquantitydifferenceintWOstrainsof cottonbollworm ，AK geneofcottonbollworm wasclonedintopET一28avectorandthentransferredintoE．coliBI21(DE3)． SDSelectrophoresisconfirmedthatAK proteinwasproducedinE．coliBL21(DE3)byIPTG induction．Themolecular weightofthefusedproteinwasconsistentwiththepredictedmolecularweight．Real—timePCR resultshowedthattheAK ex— pressionquantityofcottonbollworm inthefieldpopulationofShiheziwassignificantlyhigherthanthatfrom susceptiblepopu— lation，indicatingthatthemetabolicactivityofcottonbollworm intilefieldpopulationofShiheziwasstrongerthan thatfrom susceptiblepopulation． Keywords：argininekinase；cottonbollworm ；proteinexpression；real—timePCR 精氨 酸激酶 (ArginineKinase，AK)(ATP： 有效形成 ATP的磷酰基供体 ，能在一定时间内为 ArgineL—phosphotransferaseEC2．7．3．3)属于磷 剧烈运动提供能量 ，同时又维持 ATP 的恒定 ]。 酸原激酶家族中的重要一 员，广泛的存在 于无脊椎 AK是昆虫生命活动过程 中参与能量代谢 的关键 动物如昆虫、虾 、蟹及软体动物 中[1-4]，起着类似于脊 酶，而且仅存在于无脊椎动物中，与脊椎动物 中参与 椎动物 中肌酸激酶 (CreatineKinase，CK)(ATP： 能量代谢的 CK不同