羧甲基壳聚糖对阿霉素所致细胞膜损伤保护作用.pdfVIP

3．1胰岛素的贮存 胰岛素为多肽类物质，其稳定性易受温度及分散介质影响。胰岛素在37℃条件下稳定性最差， 密闭，在冰箱(2-10℃)贮存稳定性较好。在制剂在储存过程中，受温度及分散介质的影响，胰岛 素分子易与周同其它分子或离子发生化学反应而降解，生成A21或B3单脱酰胺胰岛素，同时也会发生 聚合反应，因此，待测样品不能长期保存，避免发生化学反应或降解。 3．2微粒测定的意义 不溶性微粒是指注射液在生产和使用过程中经各种途径污染后形成的微小颗粒杂质。静脉输液 中的不溶性微粒，可给患者带来多方面的危害，如肉芽肿、肺水肿、静脉炎、热原样反应、局部组 织血栓和坏死等。所以，我们对注射液的微粒进行考察。 3．3本实验对奥沙利铂与胰岛素注射液在5％的GS溶液中配伍的稳定性问题进行验证，实验结果显示 24h内配伍液的外观潞清，无变色、气体、沉淀、浑浊发生，微粒数、pH值等无明显变化，奥沙利 铂、胰岛素的含量也无明显变化。 羧甲基壳聚糖对阿霉素所致细胞膜损伤的保护作用 曹秀明 罗春兰杨桂群 (1哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨150076； 50076) 2国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，哈尔滨1 阿霉素(Doxorubicin，DOX)属葸醌类抗生素，是临床最为常用的广谱、高效抗肿瘤药物之一。 DOX具有严重的心脏毒性，这在一定程度上限制了DOX大剂量、K期应用。目前人们认为DOX,心脏毒性 主要与其体内代谢过程中产生大量的活性氧自由基，引起脂质过氧化反应增强，损伤细胞膜及细胞 器膜有关。己有研究表明，羧甲基壳聚糖(CM-COS)具有抗氧化作用，其抗氧化活性与清除多种活性 氧密切相关。因此，CM-COS有可能拮抗阿霉素引起的自由基毒性对细胞造成的氧化损伤。本试验将 研究CM—COS对阿霉素造成的细胞膜损伤的保护作用，并探讨其作用机制。 I．材料与方法 I．I材料 分光光度计(日木岛津公司)，低速离心机(北京离心机厂)，低温高速离心机(美国Beckman公司)， 二氧化碳培养箱(美国NBS公司)：等 1．1．2药品与试剂羧甲基壳聚糖，(中国海洋大学刘万顺教授惠赠，纯度为98％)；阿霉素(深圳 万乐约业有限公司)，使j{j前均用生理盐水溶解稀释至所需浓度；维生素C注射液(哈尔滨三精制药 MDA试剂盒、SOD试剂盒、考马斯亮蓝蛋白含量测定试剂盒，(南京建成生物工程研究所)：其它试剂 均为国产分析纯。 1．2方法 r·minl 1．2．1细胞悬液的制备将所取新鲜人全血lOml2H入备有肝素溶液的试管中，充分摇匀，2000 离，0lOmin，取下层红细胞用生理盐水洗涤，重复3次，制成10％的红细胞悬液。 1．2．2分组给药取10％的红细胞悬液，将其分成6组。分别是空白组，阿霉素损伤组，阳性药维生素 u C组，cM—COS高、中、低剂量组(其终浓度为400、600、8001)。每绢加细胞悬液lml。空 g-ml u 白组、阿霉素组加5001的生理盐水，CM-COS高、中、低剂量组分别加人等体积CM—COS，维生素C II H 组21500l维生素C使其终浓度为125g／ml，于细胞培养箱37。C先孵育24,时，阿霉素组，维生素C H 组，还有CM-COS高、中、低剂量组再加入5001阿霉素使其终浓度为5mg·L‘1。，37。c孵育2d,时。 1000)观察细胞膜形态学。 1．2．3细胞膜形态学观察取一滴细胞悬液，在显微镜下(X 浓度细胞在蒸馏水中全溶血的溶血率为100％，计算红细胞溶血率。溶血率=(测量组吸光度／全溶血 组吸光度)X100％。取沉淀细胞离心，1000r·min～，5min，生理盐水洗3次，用黄嘌呤氧化酶法测 -110- 定超氧化物歧化酶(SOD)活性和用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量。采用考马斯亮蓝 法测定全血血红蛋白含量，步骤均按试剂盒