全二维微柱液相色谱质谱鉴定人胃癌组织中差异蛋白质.pdfVIP

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究掇告 第lO期 of 2009年lO旁 ChineseJoumal Chemistry 1403一1408 Analytical 全二维微柱液相色谱。质谱鉴定 人胃癌组织中的差冥蛋白质 罗福文1，2 尚定银3 赵鹏2 张丽华鹌 贾玉杰2 张玉奎3 1(大连医科大学瘸毽生理教研塞，大连116027)2(大连黩耪大学附属二酱逶外辩，大连16027) 3(中灏科学院大连化攀物瑷研究所，大连116023) 摘要构建了以阳离子交换色谱一反相色谱(SCX-RPLC)为分离模式的新型全二维微{主液相色谱．质谱分离 平台。采用?醋黢铵缓冲滚梯度洗脱，实现了第一维肢段憋分步浚脱，洗脱戆簸段经赛祭除盐嚣逶避援墨遴 入反棚色谱微往，通过线性梯度实现第二维进一步分离，最后进入质谱进行检测。采用此平台分析了人胃癌 缝织笥正常组织提取援白囊穗惠，蒸孛歪鬻雾缰缀鉴定鼙囊度数秀537个，蘅癌症缰织签定蒸自骥数鑫兔 506个。对胃癞和正常组织两种提取碾白质酶解产物的徽自质梭索结果进行比较分析，将鉴定的蛋白魇按照 物理馊壤进纷分布，我壅正常组织笱癌症缀织翔蛋鑫爱差舞，筛选赉一耪谮能发垒变异懿癌症褥有蛋巍。 关键调胃癌缀织，爨自凑缀，二维液褶色谱-凌瀵联震 l 引 言 胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，仅次予肺癌、乳腺癌和肠癌，居第4位。每年约有64万 人因褥癌死亡，膀癌症死因的笫2健。胃癌也是我国最常觅的恶健胂瘤，全世界约骞35％的胃瘸病例 发生在中国，据估计2000年我图胃癌死亡率为24．65％…。遁过蛋白质组学技术筛选胃癌组织有关的 标志物是目前胃癌的研究热点，也是早期诊断的关键汪3l。Ha等一。对正常人胃组织进行二维电泳 (2-DE)分离，建巍了正常入臀组织的蛋白质的2-DE圈谱，并用基质辅助激光瓣吸离予萋艺飞行时阀质谱 (MALDI-TOF．MS)鉴定了其中的部分蛋白，包括胞浆蛋白、线粒体赞白、核蛋白、内质网蛋白、微体缀白 和溶酶体蛋白。剃洼渡等泌1采用表露增强激光解吸离子记(SELDI)蛋良壤芯片梭测露癌患者盛清装自 质指纹图谱，筛选候选肿瘤标志物以建立诊断模獬，并探讨其诊断昂期臀癌的临床意义。舄波等∞o利 用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离臀癌组织和正常对照组织的总蛋舀质，并通过质谱分析技术对9个差 异蛋白质点进行检测，以确定锷癌的差异蛋白质。 二维液相色谱．质谱联用作为蛋白质鉴定方法的商效手段一直受到广泛应用F’8j。“nk等洚‘开发 行二维液相色谱的分析，并与传统的方法进行比较。Wang等¨引采用整体j生制备阳离子交换／反相 h砖鉴定了780个蛋岛质。以上 (SCX／RP)～俸藏，并应用于酵母细脆提取蛋自旗酶鳃产物分析，在12 方法都是采用一体柱并且在纳升级流速下完成实验，桂制备和连接阑难。王智聪等¨刈采用常规尺寸的 色谱柱构建了正交的GFC／RP二维液相色谱分离系统，并应用于由羊血清样品的纯化分析。 在本实验室翦期工作[121的基础上，采用传统的大内径SCX柱佟为第一维色谱分离桂，第二维采用 微升级的反相色谱分析柱，方便地构建了二维液相色谱一质谱联用平臼。比较胃癌组织与正常胃黏膜组 织的蛋白质差异，为研究霭癌发霜横‘制、寻找胃癃的标志物提供了有价僵的资料。通避对提取胃组织蛋 白质胰蛋肉酶酶解，采用二维液相色谱质谱联用(2DLC-MS／MS)对其组分进行检测，比较鉴定蛋白质 在各种特性上的差异，以寻找霹能发生病变的蛋臼厦，势医学检灏獠治疗据供参考。 2009-02-26收臻；2009-05-13接受 助项目 $E-mail：lihuazhan瓣dicp。瓣，∞ 万方数据万方数据 1404 分析化学 第37卷 2实验部分 2．I仪器与试剂