荧光团杂化纳米SiO2微球作为生物标记探针的应用的研究.pdfVIP

维普资讯 Vo1．24 高 等 学 校 化 学 学报 No．3 2003年 3月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 422～ J|24 [研究快报] 荧光团杂化纳米 SiO2微球作为 生物标记探针的应用研究 曲会英，杨黄浩 ，林 鹏，李顺华，杨 薇，许金钩 (厦门大学化学化工学院现代分析教育部重点实验室．厦门大学化学系．厦门361005) 关键词 荧光团；纳米荧光探针；荧光免疫分析 中图分类号 0657．3 文献标识码 A 文章编号 0251—0790(2003)03—0422—03 近年来，无机发光量子点[引、荧光纳米乳液微球 及发光团掺杂 SiO 纳米粒子嘲等纳米荧光探 针的出现，为生物标记提供了新的发展领域．将有机染料以共价方式包埋在SiO：中所得的复合材料具 有独特的光学性质，然而其在生物标记方面的应用并未得到重视L6]．本实验通过控制荧光团修饰的 硅烷前体在反相胶束体系中的水解缩合，合成了用于生物染色和诊断的高灵敏度、高稳定性的新型荧 光团杂化纳米 SiO：微球(NFHS微球)．在 NFHS微球 中，荧光团以共价方式地均匀分散在 SiO。网络 结构中，避免了与外界体系中溶解氧的接触，并且无荧光团移动、自聚或泄漏现象．与单个有机荧光 探针相 比，每个NFHS微球含有多个荧光团，发光强度大，无闪烁现象，光化学稳定性高．以NFHS 微球为标记探针，建立 了夹心型荧光免疫分析人 a一甲胎蛋 白(AFP)的方法，测定AFP的检测限为 0．05ng／mL．作为生物标记探针，NFHS微球相 比于无机量子点和荧光纳米乳液微球的优点在于制备 和衍生方法简单 (易与生物分子偶联)、物理化学稳定性好及对生物体毒性很小[8]，可通过改变荧光团 和硅烷前体的种类合成发光性质不同的NFHS微球，以适应不同实验的需要． 1 实验部分 1．1 荧光团修饰硅烷前体的合成与表征 在 1mL的无水吡啶中加入 5×10 mol3-氨丙基三甲氧基 硅烷(APTMOs)和 5×10 mol异硫氰酸荧光素(FITC)，在氮气保护下反应 12h．合成的荧光团修饰 前体不经提纯，以ESI质谱检测，并直接使用． 1．2 NFHS微球的合成与表征 荧光团修饰硅烷前体与四甲氧基硅烷 (TMOS)以不同摩尔比混合， 得到两种前体的混合液．前体混合液、H。O和NHOH 以摩尔 比(1：8：0．1)混合(前体混合液以硅量 计算摩尔数)，在冰水浴中超声 30min，得到澄清透明的溶胶．将此溶胶 (含硅前体共0．03mo1)加入 由 非离子表面活性剂 TritonX一100形成的反相胶束体系中进行凝胶化反应．反相胶束的制备依照Osseo— Asare~使用的方法．凝胶化反应进行 10h后，将反应混合物旋转蒸发，除去溶剂环己烷．将产物用丙 酮和水分别洗涤 3次，除去TrionX—100和未反应的硅烷前体，得到纯化的NFHS微球． 1．3 NFHS微球表面的氨基修饰 在5omL的甲醇溶液(含8o APTMOS)中加入20mgNFHS微 球．混合液在室温下搅拌 2h后，快速升温到69C，继续搅拌 5min，冷却到室温．加入 10ml10 的 三甲基氯硅烷和少量的(CH。)NOH ·5H：O，继续搅拌 2h后，在 60C下旋转蒸发得到油状液体．加 入丙酮后得到橙色沉淀，并以乙醇和水各洗涤沉淀 1次，以除去未反应的分子．经修饰后的NFHS微 球表面的氨基以红外光谱进行检测． 1．4 抗体与NFHS微球的偶联 在本实验中，将羊抗AFP多抗通过双功能试剂——戊二醛直接偶联 到经氨基修饰的NFHS微球表面．将 10mg氨基修饰的NFHS微球分散在含体积分数为5 的戊二醛 收稿 日期：2002一10一10． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号资助． 联系人简介：许金钩(1937年出生)，男 ，教授，博士生导师，从事分子发光分析和生化分析研究．E—mail：jgxu@xmu．cdu．cn 维普资讯 No．3