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中国园艺学会十字花科分会第十一届学术研讨会论文集2013：149．153 中国园艺学会十字花科蔬菜分会汇编
不结球白菜Pol’胞质雄性不育花酵母双杂交oDNA文
库的构建及评价
刘同坤1’2，李英1’2，张昌伟L2，侯喜林木
(南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室，2．南京农业大学园艺学院，南京210095)
摘要：从不结球白菜Pol胞质雄性不育花中提取总RNA后，再利用磁珠法从中分离纯化出mRNA，然后
eDNA)。
以mRNA为模板，反转录合成eDNA第一链，再在DNA聚合酶作用下，通过长距离PCR，扩增双链eDNA(ds
利用SMART技术，通过同源重组的方法，在酵母菌株Y187中构建了不结球白菜Pol胞质雄性不育花的全长
eDNA文库。经检测，文库的转化率为1．80X106转化子／ugpGADT7一Rec，文库滴度为1．21×107pfu／mL，
重组率为94％。
关键词：不结球白菜，Pol胞质雄性不育，酵母双杂交文库
ofYeastTwo eDNA
ConstructionandEvaluation of
HybridLibrary
ca flowerswithPolCMS
Chinese
non—heading bbage
LIU Shuol，2，YANG
Tong-kunl一，ZHANG Xue．don91一，
Geneticsand
Germplasm
(1lStateKeyLaboratoryofCrop Enhancement,NanjingAgricultural
Southern Genetic
of Vegetable
University；2．KeyLaboratory Crop Improvement,Ministryof
21
collegeofNanjingagriculturaluniversity,Nanjing0095,China)
Agriculture；3．Horticulture
RNAwasisolatedfromPolCMSflowersof
Abstract：Thetotal Chinese
non．heading
was and theSA-PMPsmethod。WeusedmRNAaS
andmRNA purifiedusing
cabbage separated
thefriststrand thenobtaineddoublestrandeDNA
and cDNA，and
templatesynthesized byusing
LD—PCR SM-ART and method．we
using
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