填充毛细管波相色谱法检测蜂蜜中残留的抗生素.pdfVIP

LC．030 填充毛细管液相色谱法检测蜂蜜中残留的抗生素 黄宏南 陈天豹陈儒明饶平凡 (福建省卫生防疫站禽品科福州350【)01) (福州大学生物T程研究所福州350002) 1前言 抗生素的出现为人类和动物的防病治病起到了重要的作用，其中四环索族中的四环 素、土霉素及金霉素广泛地使用丁．饲料添加剂和各种动物药物中，但动物性食品中抗生素 的残留也给人体造成了一定的危害。剐此，各国对食品中的抗生素残留量都有严格规定。 在饲养蜜蜂的过程中，人口j经常使用带有抗生索的饲料，这对蜜蜂疾病的防治具有良好的 效果，同时也造成了蜂蜜中抗生素的残留。因此，检测蜂蜜中抗生素的含量是控制蜂蜜质 量的一个重要指标。在我国，常用的对蜂蜜中四环素类抗生素残窗量的检测人多采用微生 物管碟法“1，操作繁琐且耗时。HISAO等。1报道了用反相色谱和离予交换色谱相串联的色 谱方法，但该方法需要复杂的仪器操作和设备。本文使用的毛细管高压液相色谱(cLc)， 以新型的微量溶剂输送系统，用50 um的毛细管柱代替常规高压液相色谱管道，常用流 量仅为5uL／m|n，利用自己填充的内径为O．5mm的毛细管色谱柱，采用毛细管在线检测， 人大地提高了检测灵敏度。 2实验方法 2 1仪器与试剂 Perkin—E1mer毛细管液相色谱仪．带ABI140D微量泵输送系统，785A可编程紫外． 可见光检测仪和610A2．1数据处理系统。四环素、土霉素和金霉素由中国药品生物制品 检定所提供，色谱用的乙腈是美国Pe州n．Elmer公司(蛋白质测序试剂)；其它试剂均为分 析纯，用石英重蒸水配制。 22操作条件 um，150mm×O．5mm不锈钢柱(自己填充)。流动相：起始 分析柱：Hypersilc…3 时间：60min；流速：5uL，min；进样量：50uL；检测波长：357nfn。 2．3溶液的配制 (1)标准溶液的配制：分别准确称取标准物四环素、土霉素和金霉素10．O，lO．0和 rnL 40．Omg，置于100mL容量瓶中。用流动相溶解并定容至刻度。用移液器准确吸取O．1 标准溶液，用容量瓶稀释10倍进样。 (2)样品溶液的配制：取25rnL的蜂蜜在微热条件下溶于60mL0．05mo儿H3P04溶液中， 加入20mL乙腈，再用0．05mol，L H3P04溶液定容至100mL，微孔滤膜过滤后取50uL进 样。 2．4分析测定 按上述色谱条件进行色谱测定，根据峰面积归一化法，经计算可以测出蜂蜜中抗生素 的含量。标准色谱图见图1。 ．82． 3结果与讨论 3，1色谱条件的选择 对流动相的组成进行选择，确定以乙腈水溶液为洗脱溶液，力¨入o05mol／L储酸二：氢 钠或O．1％三氟乙酸等司以改善分离效果。对检测波长进行选择，以357nm波跃为佳，可 以很好地进行直接检测i面不会有明显的干扰。 3．2工作曲线的绘制 05，O 配制不同浓度的标准溶液，分别为O，4，O，2，O．1，001【ngn，在上述色谱条件 r进样50I止，样品量相当于20，10，5，25．o．5ng。用数据收集系统收集数据并进行 面积定量，以面积为横坐标．浓度为纵坐标，绘制工作曲线，得回归方程lroTc=一一1．565× 997 36，呈良好的线性关系，证明本方法 数分别为，01c：：0．99695，rTc=O78和，arc=0．988 委现性好，定量准确而且灵敏度极好，比常规高压液相色谱法”’灵敏度高100倍以上。 3．3蜂蜜中挠生素残翟量的检测 如图2所示，蜂蜜中抗生素的残留量极低，土霉索(DTc)和四环索(Tc)几乎未检出， 其检出量根据峰面积和标准工作曲线的回归方程计算，接近检出极限0．02mg，L。金霉煮 (CTC)的检出量也非常小，为0．08mg，L．