微柱HPLC法快速测定维生素谱的应用的研究.pdfVIP

LC一102 微柱HPLc法快速测定维生素谱的应用研究 赵清王泽仿叶绿杨德立周俊岭 (第一军医大学中心实验室广州510515) 1前言 维生素(Ⅶamin)是生物机体生长代谢过程中所必需的有机物。机体需要的量小，但 其在体内所发挥的作用却很大，机体一旦出现维生素的缺乏便会产生疾病。目前，医学上 对维生素在机体代谢中的作用、疾病的发生发展、营养和治疗等方面的研究都有较长足的 发展，同时也增进了许多对维生素的新认识11Jo国内外均有许多文献报道维生素与癌症发 生发展的关系oo、维生素c的抗氧化作用”以及v。对机体免疫功能改善及抗衰老机制探讨”1 等单个维生素或成组维生素作用机制的研究文章，其研究测定方法大多采用常规HPLc 测定，也有使用离子交换色谱测定多个维生素组分的文献报道“。但对维生素谱的测定研 究国内还极少见报道。 本文使用微柱HPLc分析维生素谱能达到准确快速测定的目的，25min便可全部洗 脱所有维生素，其组分分离度在1．25以上，仪器稳定重现性测定峰保留时间变异系数 2％(维生紊A除外)，洗脱液用量少于150pL，min，检测器最低线性检测限2．5×1 o-l‘g， 系统方法回收率(维生素A除外)均大于90％。血清样品处理方法简单，分析用样量少(每 次l~2乩)可较好地解决样品来源困难的问题。 2材料与方法 2．1仪器与试剂 140B两元微量恒 美国ABI公司AppliedBi0-sys衄s微柱高效液相色谱系统：Model RP-300色谱柱，柱体积50Ⅻn× 流注射泵；Modelll2A手动进样器，柱恒温箱；Aquapore ELMER瑚．UsA)。 系统软件(粼IN 2．2样品制备 um孔径滤膜过滤后上 临床空腹非抗凝取血lmL，避光冷藏制得血清，血清用0．45 机分析。 2．3色谱条件 pL。 254、280和320m，检测灵敏度均为0．们AuFs．进样量为2 3结果 3．1 标准曲线和标准样品的测定 准确称取腊溶维生紊A，D：，E标准品．分别用无水乙醇溶解(维生素A应避光操作)： 准确称取维生素C、尼克酰胺、B．、B：、B6标准品(均为sjgma公司产品)，分别用A洗 脱液溶解。按一定的比例分别将上述标准品溶液混合，制成标准样品，L机分析得剑如图 l所示的标准品组分洗脱色谱峰。将混台标准样品按倍比稀释法稀释6次，分别上机测得 各样品组分峰面积值，用浓度对峰面积做线性回归分析，图2(略)为标准样品的标准曲线。 32血清样品测定和仪器稳定性试验 血清样品上机分析得到如图3(略)组分洗脱色谱图，从图中可以看出血清中维生素与 标准样品有一一对应的组分峰。将同～份血清样品避光冷藏保存2，4，8，12，24h用同 一色谱条件分析，组分出峰时间变异系数除维生素外均3．2％，组分量的变异系数除维 生素A外其它均2％。表2(略)出示仪器稳定性实验结果。 3．3回收率实验 用标准品为添加参照做回收试验，按表2(略)进行样品处理，连续检测，得到这5个 样品管中组分峰面积，用“回收率=(样品测定峰面积一对照管测定峰面积)／标准品测定峰 面积”，算得回收率如表3所示(略)。 ∞ 4讨论 检测体内维生素水平为研究维生 吾 帅 素对机体的作用提供了有效的方法和 i ∞ 重要的依据。用生物法测定维生素准 善 确性低，不适合常规分析。用物理和 i 帅 化学方法不能完全排除干扰物质的影 詈 加 响。用常规高效液相色谱法虽能达到 。 较好的分析分离，但样品用