一种适用于多数植物病原真菌的单孢分离方法.pdfVIP

安徽农业科学 ，JournalofAnhuiA ．Sci．2011，39(9)：5263—5264 责任编辑 郑丹丹 责任校对 况玲玲 一 种适用于多数植物病原真 菌的单孢分离方法 邱小燕，汤智鹏，张敏 ，荆海瑜 (四川农业大学，四川雅安625014) 摘要 [目的]研究一种可靠并广泛适用于各种病原真菌的单抱分离技术。[方法]以玉米小斑病菌的单孢分离为例 ，并综合改进其他 单孢分离方法，通过组织分离、孢悬液涂布、挑针转移3个步骤 ，挑取分散在清水琼脂平板上 已经萌发的孢子获得单孢。[结果]采用该 法对多种病害标本进行单孢分离，成功率都在92％以上，部分达到 100％，单个茵丝片段的分离成功率达到60％以上。[结论]多种真菌 的分离表明，该法操作简便 ，材料设备简单 ，结果可靠，成功率高，适用性广。 关键词 玉米小斑病；单孢分离；组织分离；挑针转移 中图分类号 S132 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2011)09—05263—02 Research ontheIsolationM ethod ofSingleSporeofM ostPlantPathogenicFungi Q1U Xiao-yanetal (SiehuanAgriculturalUniversity，Yaan，Sichuan625014) Abstract [0bjective]Theisolationtechniqueofsinglespore，whichwassuitableforvariouspathogenicfungi，wasresearched．[Method] TheisolationtechniqueofsinglesporeofBipolariamaydh wasimprovedandthesinglespore，whichhadgerminatedandscatteredinthewater agarplate．waspickedupafterthreesteps：tissueisolation，coatingsporesuspensionandremovalofdissectingneedle．[Result]Thesingle sporeofmostofsampleswasisolatedwith thetechnique，whichsuccessfulratewasover92％ andpartially 100％ ；thesuccessfulrateofthe isolationofsinglehyphalfragmentwasover60％．[Conclusion]Theexperimentalresuhshowedthatthemethodwaseasytooperation，there— quirementtomaterialandequipmentwassimple，theresultwasreliable，thesuccessfulratewashighandtheapproachofitsapplicabilitywas wide． Keywords Bipolariamaydis；Singlesporeisolation；Tissueisolation；Removalofdissectionneedle 单孢分离技术不仅涉及真菌病害、病原真菌的分离纯化 右 ，避免过软造成解剖刀无法整块转移、挑针刺破等问题；由 等方面的研究，而且在病原真菌遗传特性、致病力分化等研 于用于挑取单孢的WA平板要求有较高的透光性及洁净度， 究中有重要作用。目前 ，已经有多种单孢分离方法可以供研 所以在熬煮琼脂条后需要多层纱布过滤，防止杂质过多影响 究者借鉴使用 J。但是 由于各实验室的条件不同，一些单孢 试验的操作。同时，在制作 WA时也应注意 ，培养基厚度应 分离方法中涉及的特殊工具在短时间内无法满足、单孢分离 在 2～3inn左右，过厚影响其透光性 ，过薄又难以整块从培 方法要求不同等诸多问题都限制了多种单孢分离方法的适 养皿中取下转移至载玻片上。 用范围。比如挑针转移法 无法用于一些不易在标样上产 1．2．2 显微镜的准备。将 自带光源的显微镜放人超净工作 孢的病原真菌；手工挑取真菌单孢显微操作 。的方法 ，在挑