利用BODIPY类荧光探针测定血清中游离半胱氨酸.pdfVIP

中国化学会第十六届有机分析与生物分析学术研讨会论文集 利用BODIPY 类荧光探针测定血清中游离的半胱氨酸 陆金鑫，马会民* 中国科学院化学研究所活体分析化学院重点实验室，北京100190 mahm@iccas.ac.cn 摘 要：以BODIPY为荧光母体，引入2，4-二硝基苯磺酰淬灭基团，利用分子内电荷转移 效应得到弱荧光背景的新型探针。基于巯基物质对芳环的亲核取代作用，导致探针中淬灭基 团的离去,从而引起荧光的显著增强。据此发展出一种快速、简便的半胱氨酸检测方法，并 用于人血清中游离半胱氨酸的测定。 关键词：BODIPY ；荧光探针；半胱氨酸检测；人血清 中图分类号：O657.31 生理巯基物质包括谷胱甘肽、半胱氨酸和同型 理浓度的无机盐、氧化性物种、氨基酸均不会对半 半胱氨酸，它们在生物体的氧化还原过程中发挥着 胱氨酸的测定产生干扰。将四份不同个体的人血清 [1] 重要作用 。半胱氨酸的缺乏和儿童发育迟缓、肝 去蛋白，取上清液进行分析，得到游离半胱氨酸的 [2] 脏损伤、身体浮肿等病症相关 ，因此半胱氨酸的 浓度。经95%置信区间的t 检验，所测得的结果与 检测对于生化研究和疾病诊断均有重要意义。本实 DTNB 衍生的HPLC 法测定的结果相符，验证了此 验以BODIPY 为母体，设计合成了选择性检测半胱 方法的可靠性（表1）。 氨酸的荧光探针，并建立了一种测定人血清中游离 半胱氨酸的简便方法。 表 1 人血清中游离半胱氨酸的测定 1 仪器与方法 样品 本法 (μM) DTNB 衍生HPLC 日立F-2500荧光光谱仪，岛津LC-20A高效液相 法(μM) 色谱仪；所有化学试剂均为分析纯；蒸馏去离子水； 血清 A 7.35 ± 0.05 7.28 ± 0.04 血清样品由北大第一医院提供。 血清 B 9.41 ± 0.23 9.25 ± 0.16 在氩气保护下将100μL探针储备液（0.5 mM ） 血清 C 8.30 ± 0.02 8.23 ± 0.04 溶于5 mL DMSO和4.5 mL HEPES缓冲液（100 mM， 血清 D 6.42 ± 0.11 6.37 ± 0.03 pH 7.8 ）,加入一定体积的半胱氨酸标准溶液（2 mM ） 国家自然科学基金（Nos. and 后定容至10 mL,室温反应20 min后测定荧光峰值F ）, 科技部（2010CB933502 ）和中科院资 （λex/em = 480/512 nm ）。荧光增强值ΔF为F和相应 助。 试剂空白溶液的荧光强度F 的差值。 0 2 结果与讨论 参考文献： 由半胱氨酸的滴定实验可知，在半胱氨酸浓度 [1] W. Y. Lin, L. Yuan, Z. M. Cao, Y. M. Feng, L. L. Long, 为2-12 μM 的范围内存在线性关系，线性方程ΔF/F0 Chem. Eur. J. 15 (2009) 5096. = 1.54 × C