RNA原位杂交实用技术.pdfVIP

植物学通报 　2002 , 19 (2) :234～238 Chinese Bulletin of Botany 技术与方法 RNA 原位杂交实用技术① ② 徐云远 　种 　康 　许智宏 　谭克辉 ( 中国科学院植物研究所 　北京 　100093) 摘要 　利用互补 RNA 为探针进行原位杂交是分析组织或细胞内 RNA 分布的行之有效的方法 ,通过对 mRNA 分布的研究可以了解特定基因的表达情况 。原位杂交技术过程较长 ,操作繁琐 ,从而在一些实验 中不能得到很好的使用 ,为此本文根据我们过去的实际操作经验对该技术中的一些使用技巧作简要的 介绍 。 关键词 　原位杂交 ,基因表达 The Practical Technique of in situ Hybridization with RNA Probe XU Yun- Yuan 　CHONG Kang 　XU Zhi- Hong 　TAN Ke- Hui ( Institute of Botany , The Chinese Academy of Science , Beijing 100093) Abstract 　In situ hybridization with complement RNA probe is an effective method to detect the distribution of RNA in tissue or cell , by which the expression pattern of gene can consequently be revealed. As the complete process is longer and more complex than other molecular hybridization , the application of this method , however is limited in common laboratories. In order to make this technique be used widely in routine experiments , the practical skills were introduced based on past experience. Key words 　In situ hybridization , Expression of gene 随着越来越多的基因被克隆 ,探索这些基因的表达模式是研究其功能的重要环节之 一 。利用Northern 杂交可以说明特定基因在不同器官不同时期的表达情况 ,如果要在显 微或亚显微水平对一些基因的时空表达进行研究 ,Northern 杂交就显得无能为力 。根据 ( 核酸分子杂交的基本原理和免疫组织化学的成熟方法而发展的原位杂交技术 ISH , in ) ( ) situ hybridization Gall and Pardue ,1969 ; John et al , 1969 为我们提供了行之有效的途径 。 利用 RNA 作为探针 ,与组织内的 RNA 靶序列杂交 ,这样可以了解组织或细胞内RNA 的分布和数量 ,而且与 DNA 探针相比,使用 RNA 探针有其独特的优点 : RNA : RNA 热稳 定 ,所以杂交反应结束后可以用高严谨条件洗涤降低背景 ;cRNA :RNA 酶稳定 ,杂交反应 结束后可以用 RNase 进行酶解除去游离的 RNA 探针 , 以降低背景 ;杂交效率高 ,根据 Cox ( ) μ μ