川芎多糖除蛋白方法的研究.pdfVIP

MEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL．20NO．9 时珍国医国药2009年第20卷第9期LISHIZHEN 川芎多糖除蛋白方法研究 方升平，王维香。，雒小龙 (西华大学生物工程学院，四川成都610039) 摘要：目的对川芎多糖进行除蛋白处理，筛选最佳除蛋白A-法-。方法采用Sevag法、三氯乙酸法、三氯乙酸一正丁醇法 3种方法对川芎多糖进行除蛋白处理，通过比较不同方法处理后的蛋白含量及多糖含量来确定最佳的除蛋白方法。结果 73．19％；三氯乙酸一正丁醇法的蛋白质去除率为83．60％，多糖回收率为85．16％，且操作快速、简便。结论三氛乙酸一 正丁醇法除蛋白效果较好。 关键词：川芎；多糖；除蛋白 中图分类号：R285．5文献标识码：B 文章编号：l008旬805(2009)09-2176-02 川芎为《中国药典)2005年版(I部)收载品种，为伞形科植2．3蛋白质合量测定紫外吸收直接测定法¨训在紫外分光光度 am和260am两 物川芎LigusticumchuanxiongHolt．的干燥根茎，具有活血行气、计上，以生理盐水为对照，测得待测溶液在280 祛风止痛的功效，常用于治疗月经不调，经闭痛经，症瘕腹痛，胸 种波长的吸光度(A瑚。及A260。。)。将A瑚。和A瑚。波长处测得 胁刺痛，跌扑肿痛，头痛，风湿痹痛。“。JiI芎含有内酯类、生物碱的吸光度按下列公式计算蛋白质的浓度。 C=1．45 类、酚类、以及挥发油类等多种化合物，对其多糖的研究也逐步受 A2加。。一0．74J4260。。 nni处测得 到重视‘2’“。鉴于多糖是构成牛命的基本物质之一，具有多种生 式中C：蛋白质浓度(mg／m1)；A：∞。：溶液在280 理活性’“，对川芎多糖的研究就显得尤为必要。 的吸光度；A260。i溶液在260nm处测得的吸光度。 系统研究川芎中多糖物质，阐明其生物活性，为开发高技术 2．4 除蛋白方法 2．4．1 rrIl浓缩糖液，将氯仿按浓缩液1／5体积加 含量的川芎多糖保健食品和药物提供理论基础。其中，川芎多糖 Sevag法取25 分离纯化是首要和关键的步骤，多糖纯度的高低直接影响后续的 入，随之再加入氯仿体积1／5的正丁醇，混合物剧烈振荡30rain， 性质、结构分析、药理活性以及构效关系研究的准确性。在多糖 分出水层和有机层交界处的变性蛋白质。重复上述操作，直至无 提取液中““，蛋白质却占了很大的比例，因此，如何尽量多去除 变性蛋白质出现。测定上清液的多糖浓度和蛋白质浓度。 mol／L三 蛋白质而保留多糖的有效成分是一个具有重要意义的课题。多 2．4．2三氯乙酸法取25ml浓缩糖液。加入适量的2 氯乙酸溶液，混合器上振荡混合均匀后4。C下静置过夜，离心弃 糖中蛋白质的去除方法有多种，包括Sevage法“、三氯乙酸 法-引、蛋白酶法…、盐酸法。8J等。不同的方法适用不同来源的多去沉淀，收集上清液，测定多糖浓度和蛋白质浓度。 糖，要具体摸索，实验中常采用几种方法联合除蛋白。目前尚未 2．4．3三氯乙酸一正丁醇法取25ml浓缩糖液。加入适量的三 见到去除川芎多糖中蛋白质的研究报道，本实验对川芎多糖粗提 氯乙酸与正丁醇的混合液于混和振荡器上混合均匀，4℃下静置 液中蛋白质的去除方法进行了初步探讨。 一段时间，离心弃去沉淀，收集上清液，测定多糖浓度和蛋白质浓 1材料与仪器