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IHC Rabbit DAB 兔抗体免疫组化试剂盒说明书 DAB, RABBIT DAB, RABBIT （DDAABB,,RRAABBBBIITT） cat#/产品编号 （ENS004） size/规格：60 张片/120 张片 Store at/保存温度： 4℃ 一、产品介绍 适用于免疫组化方法的石蜡包埋、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本。 二、试剂盒组成 1、试剂A: 封闭液，为10％山羊血清。1瓶，即用型；3mL(60 张片) 或6mL (120 张片)。 2、试剂B：抗兔生物素化二抗。1瓶，即用型；3mL(60 张片)或6mL (120 张片)。 3、试剂C: 链亲和素标记HRP。1瓶，即用型；3mL(60 张片)或6mL (120 张片)。 4、试剂D: 20倍浓缩DAB底物缓冲液。一支，160μL(60 张片)或320 μL (120 张片)。 5、试剂E: 20倍浓缩DAB显色液。一支，160μL(60 张片)或320μL (120 张片)。 6、试剂F: 20倍浓缩底物溶液。一支，160μL(60 张片)或320μL (120 张片)。 7、7mL黑色滴瓶 (空)，用于稀释浓缩DAB用。使用完毕一定要洗干 净。 1 IHC Rabbit DAB 三、保存温度：2℃～8℃保存。 四、所需试剂及材料（本试剂盒未提供,,需要用户自己准备）：,, 1、二甲苯、乙醇、无水甲醇 2、蒸馏水或去离子水 3、30％ HO 2 2 4、10 mM PBS, pH 7.4或50mM TBS, pH 7.8 5、一抗（兔抗体） 6、苏木精染液 7、封片胶 8、显微镜 五、推荐染色步骤：（以石蜡切片为例） 1、标本制备 石蜡切片用二甲苯常规脱蜡、入水、抗原修复（可根据一抗说明书推 荐方法进行操作）。染色前用PBS浸泡组织或细胞涂片10分钟。（注意： 从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥） 2、染色 1）石蜡切片放入3％HO-甲醇液中浸泡10分钟，以消除内源性过 2 2 氧化氢酶的作用。 2）用PBS洗2 分钟/次×3次。 3）加一滴试剂A于组织切片上（需完全覆盖待检组织）孵育10分 钟。 4）倒掉或吸干液体（不要冲洗）。 5）每张切片加二滴（100μL）或适量一抗（需完全覆盖待检组织）， 2 IHC Rabbit DAB 湿盒内孵育30～60分钟。 6）用PBS洗2分钟/次×3次。 7）每张切片加一滴试剂B（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟。 8） 用PBS洗2分钟/次×3次。 9）每张切片加一滴试剂C（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟。 10）用PBS洗2分钟/次×3次。 11）制备DAB显色液（需现用现配；以染一张切片为例；可根据需 要一次染多张切片，具体用量见下表） ① 取2.5μL试剂D加入到50μL蒸馏水中，混匀。 ② 取2.5μL试剂E、2.5μL试剂F加入①中，混匀。 配制DAB显色液所需试剂D、E、F用量表 切片数（张） 试剂D 试剂E 试剂F