哺乳动物精子冷冻干燥保存技术的研究进展.pdfVIP

上海农业学报 2010，26(2)：110—113 ActaAgriculturaeShanghai 文章编号 ：1000．3924(2O1O)O2．110．04 哺乳动物精子冷冻干燥保存技术研究进展 孟祥黔 。 ，张德福 ，马恒东 ，戴建军 ，吴彩凤 ，¨，张廷宇2,3 ( 四川农业大学生命科学与理学院，雅安 625014；上海农业科学 院畜牧兽 医研究所 ，上海 201106； ’上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室，上海 201106) 摘 要：概述了国内外哺乳动物精子冷冻干燥保存研究工作现状，阐述了精子冷冻干燥研究历史、精子冷冻 干燥保存机理、冷冻保存保护剂及相关处理研究进程 ，并探讨 了 目前研究中存在的问题和今后的研究展望 。 关键词 ：哺乳动物；精子 ；冷冻干燥 ；单精子注射 中图分类号 ：$814．8 文献标识码 ：A Research progressin freeze-dryingpreservation ofmammals’sperms MENGXiang-qian’～，ZHANGDe—fu～，MAHeng·dong，DAIJian-jun ， W U Cai-feng ·¨ ．ZHANG Ting-yu ’ (College0厂LfeScience，SichuanAgriculturalUniversity，Yaan625014，China； AnimalH usbandryand VeterinaryResearch Institute，SAAS，Shanghai201106，China； ShanghaiKeyLaboratoryofAgri—GeneticsandBreeding，Shanghai201106，China) Abstract：Thisarticle summarizesthe research work offreeze—drying preservation ofmammals spermsathomeandabroad，expoundstheresearch history，themechanism offreeze—dryingpreserva— tion，theprotectantsandrelatedtreatments，anddiscussestheexistentproblemsandfutureprospects． Keywords：Mammal；Spermatozoa；Freeze-drying；ICSI(Intracytoplasmicsperm injection) 冷冻干燥保存法不需要液氮，样品保存的空间较小 ，运输成本低 ，较常规低温保存经济实用。然而最 大的缺点是冻干精子复水后处于形态学上 的 “死亡”状态，完全丧失了与卵母细胞 自然受精的能力 ，阻碍 了冷冻干燥保存精子的后续研究。单精子注射 (Intracytoplasmicsperm injection，ICSI)技术 的诞生 ，加 速了冷冻干燥保存精子的研究进程 ，如精子冻干方法 、损伤机理等。冷冻干燥保存法有助于多个物种在 简单条件下进行精子保存 ，因而成为近年新 的研究热点。 目前，人们 已经逐步开展 了关于精子冷冻干燥 及其损伤机理等的研究，并取得了较好 的成果 ，如保护剂 pH、保护剂组成 、部分试验操作环境等因素对冷 冻干燥精子的影响 。 1 国内外研究现状 已有研究报道把小鼠、兔和大鼠的冷冻干燥精子通过单精子注射 ICSI技术注射到卵母细胞中，使之 发育并产 出活的后代[1I3]。在大型哺乳动物方面 ，牛只能发育到胚泡状态[4]，而猪出现流产现象，得到发 育畸形的胚胎 ]。1991年在保存时间上的研究表明：人的冷冻干燥精子在 4℃条件下保存 12个月后，注 射到地 鼠卵细胞中仍然能形成雄原核 ，且在高温处理 30min后注射依然保留这一功能[6]。 由于冷冻干燥后精子受精率非常低 ，甚至低于低温保存 的精子的受精能力[7]，促使人们对其进一步 探索研究。在几十年的发展历程中，冷冻干燥的步骤主要分为两大部分 ：第一 ，精子获取和冷冻干燥的前 处理；第二 ，冷冻干燥过程 中的处理 。 收稿 日期 ：2009—03—11初稿 ；2009—12—30二改稿 项 目基金：上海市农业遗传育种重点实验