肾脏疾病基因治疗.pdfVIP

肾脏疾病的基因治疗 南京医科大学第一附属医院肾内科赵卫红 1990年的第一例基因治疗如大家所望获得了成功。继后基因治疗的研究不断开展。基 于目前临床前期试验和临床试验鼓舞人心的研究结果，可以预测基因治疗在先天性和获得性 疾病中有巨大潜力。基因治疗最初的原则是通过纠正DNA序列修复基因缺陷，现在基因治 疗已扩大运用到癌症的免疫疗法，许多急慢性疾病以及干细胞的基因疗法。早在十年前已开 始有关’紧脏基因转移方面的实验研究。一些遗传性肾脏病是基因治疗在肾病领域的主要目 标，而慢性进展性肾脏病已被挑战。 肾脏是高度分化的器官，由小球、小管和肾间质等组成。这些解剖结构由基底膜和伴随 细胞分隔开。肾小球基底膜把血流和尿液分离开，小管基底膜则分隔开尿液和肾间质液。这 些屏障使载体难以透过，从而加大了基因转染的难度。目前至少有四种方法可能把基因导入 肾脏，动脉，静脉，输尿管以及直接注入肾实质。 如何特异而有效地转导治疗基因是基因治疗的关键。病毒载体已被证实比其他理化方法 更具效率。绝大多数载体已在活体内试验中测试过其将基因导入。肾脏的能力。目前基因治疗 的载体主要有病毒载体和非病毒载体。病毒载体主要有逆转录病毒载体、HJV的慢病毒亚科 载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体。 病毒载体 (1)逆转录病毒载体 逆转录病毒载体可随机地整合入宿主基因组，在理论上可长时问地表达转基因。然而， 体内试验中，由于整合基因中DNA的甲基化，基因表达在8—10周会停止。逆转录病毒需 要细胞分裂才能稳定地整合入宿主基因组，由逆转录病毒介导的基因转导较难在有丝分裂较 低的肾细胞中完成。 ：． (2)慢病毒亚科 来自HIV的慢病毒亚科载体的优点是它们能够感染并且稳定地转导晚期分化的非分裂 细胞。用慢病毒亚科载体，通过肾动脉、肾静脉、输尿管逆行灌注，以及直接注入肾实质 等方法，将lacZ基因导入小鼠肾脏。经肾静脉和肾动R永的方法显示，B一半乳糖苷酶在内髓 质集合管细胞呈局限的斑片状表达。行输尿管灌注后，研究者观察到B一半乳糖苷酶主要在 外髓质和皮髓交界区表达，准确地说是在近端小管和部分皮质集合管的s2和S3片段处表 达。沿注射途径直接注入实质法将B．半乳糖苷酶导入细胞，其分布似乎更倾向于依赖注射 过程而不是根据特异的病毒嗜性。在用慢病毒亚科转移基因的实验证实转基因可长时间表 达，未观察到明显的组织学异常，这表明慢病毒亚科可用于肾脏病基因治疗的可能性。但是， 在人体，其基因表达的效力仍需提高，其安全性也有待证实。 (3)腺病毒载体 腺病毒载体宿主很多，对非分裂细胞的基因转运是最有效的载体。但是，腺病毒也有其 劣势。腺病毒载体可因病毒蛋白引发免疫原性并诱导菲特异性炎症反应。腺病毒载体对肾细 胞基因转导的机制有待明确。基因表达与注射腺病毒载体的方法有关，用于人体的方法则仍 需进一步确定。 (d)腺相关病毒载体 166 重组腺相关病毒(AAV)是腺病毒和逆转录病毒的很有前景的替代品。AAV属细小病毒 组，是一种单链DNA病毒，它可以特异地整合入人类19号染色体中。AAV可把基因转导 入分裂细胞和非分裂细胞。研究显示，把AAV直接注入肾实质，会引起基因在近注射区的 小管上皮细胞大量表达，而不是在肾小球或血管内皮细胞。 非病毒载体 f1)反义寡核苷酸，诱饵DNA和siRNA 用静脉注射法小片段DNA和RNA分子可较好地转导入近端小管细胞。该摄取过程可． 能由近端小管的内吞作用介导。体内试验己证明近端小管细胞吸收寡核苷酸以及反义寡脱氧 核瞢酸的抑制作用。诱饵可用于抑制特殊蛋白的转录因子。诱饵策略与反义寡脱氧核苷酸 相比，有几大优势：双链DNA更稳定。单个的诱饵可抑制启动子区域编码相同顺式元件 的几个基因。siRNA是一种可通过瓦解特定mRNA达到调节细胞功能的新工具。以我们的 经验，一旦siRNA被引入细胞，其对特定基因的抑制作用通常是稳定可靠的。 (2)裸露DNA和基于流体动力学的基因转移 基因传递最简单的载体即质粒DNA，它的转染效率一般很低。然而，基于流体动力学 的过程则可以在肝脏