人脐血间充质干细胞分离培养的研究进展.pdfVIP

第 32卷第 1期 同济大 学学报 医学版 VoI_32NO．1 2011年2月 JOURNALOFTONGflUNIVERSITY MEDICALSCIENCE Feb．，2Ol1 doi：10．3969／j．issnl008—0392．2011．01．120 ·综 述 · 人脐血间充质干细胞分离培养的研究进展 何晓婷 综述，李怀芳 审校 同济大学附属同济医院妇产科，上海 200065 【关键词】间充质干细胞；人脐血；分离；培养 【中图分类号1R394．2 【文献标志码】A 【文章编号】1008—0392 2011 01—0120—05 干细胞是一类具有 自我复制能力和产生分化细 毒、艾滋病等传染性疾病及妊娠并发症，胎儿无先天 胞能力的细胞，分为胚胎干细胞和成体干细胞。间 性疾病 。顺产或剖宫产术中，在胎儿娩 出后距胎儿 充质干细胞 mesenchymalstemcells，MSCs 属于成 5—7cm处对脐带进行双结扎，剪断脐带，消毒断 体干细胞的一种，来源于胚胎发育早期的中胚层和 端，穿刺孕妇端脐血管抽取脐血，并用肝素20U／ml 外胚层，最早在骨髓 bonemarrow，BM 中被发现 。 抗凝。采集的新鲜血液于 18℃保存 ，于 12h内完 在特定的培养条件下，骨髓问充质干细胞可被分化 成细胞分离。 为软骨、骨、脂肪、肌肉、韧带、神经、胰岛样细胞等。 1．1．1 采集的血量 采集过程中尽可能多的将脐 但是从人骨髓中获取间充质干细胞属于有创操作不 血留在脐带内，有助于提高 hUCB．MSCs的培养成 宜进行 J，其分化潜能还会随着年龄 的增长而下 功率。单份脐带采集 的血量越 多，所 能获得 的 降 J，并且有携带病毒的可能性…。一直作为胎儿 hUCB—MSCs就越多，培养成功的几率也就越大 J。 分娩后废弃物的脐带以及脐血 humanumbilical 因此在采集过程中应小心操作，避免按压子宫或挤 cordblood，hUCB 。因此，受到了关注。研究证 明 压脐带和胎盘。 脐血中的确存在MSCs_3J，其各方面特性也与 BM- 1．1．2 采集时间的控制 采集时间是指从胎儿娩 MSCs相似 J。除此之外，MSCs还具有低免疫原性 出获得脐带血开始，到收集相关细胞并培养至培 的特点 J，并较少受到伦理学的限制_6J，近年来，越 养器皿中所用的时间。为了最大限度的保证干细 来越受到组织工程和再生医学的青睐。 胞活性，采集时间越短培养效果越好 ，时间至少控 与BM—MSCs相比，目前培养hUCB．MSCs的主 制在 15h以内 。也有学者认为超过6h即会降低 要困难在于脐血中间充质干细胞含量太少，培养速 hUCB．MSCs的活性而增加其培养难度 J。 度慢，培养成功率不高等 问题 。改进 hUCB— 1．2 分离纯化 MSCs采集分离方法、优化体外培养条件对于进一 分离脐带血 目前尚无统一的方法，常见的分离 步研究应用hUCB-MSCs至关重要。 方法有以下几种 ： 1 密度梯度离心法：将脐血滴 加在 Ficoll—Hypaque或Percol1分离液表面进行密度 1 人脐血的采集、分离纯化及培养 梯度离心分离出血液中的单核细胞。此法简便易 1．1 采集 行，但操作步骤过多以及必须使用淋巴细胞分离液， 通常选择健康足月产或早产产妇，无肝炎、梅 有可能增加 hUCB．MSCs被污染的风险； 2 贴壁 收稿 日期：2010—08—30 基金项 目：上海市科学技术委员会科研计划项 目课题 0座机电话号码00 作者简介：何晓婷 1983一 ，女，硕士研究生．E-mail：eileen5512@hotmail．tom 通信作者：李怀芳．Em·ail：huaifangli@126．com 第 1期 何晓婷 等 ：人脐血问充质干细胞分离培养的研究进展 筛选法 ：利用 hUCB—MSCs容易在塑料材料上贴壁 备以下几方面特点： 1 具备细胞生长所需的各种 生长的特性，将其与造血系统细胞及淋巴细胞分离 营养成分，支持细胞生长； 2 无外源性干扰杂质， 并传代扩增； 3 流式细胞仪分选法：利用 hUCB． 不影响细胞的原有特性； 3 性质稳定，容易制备和 MSCs大小或细胞表面的特殊标志，采用流式细胞 保存。 仪对其进行分选，从而获得 目标细胞； 4 免疫磁珠 目前培养效果较好的hUCB．MSCs基础培养基 分离法：利用表面覆盖有特异性抗体的磁珠与问充 主要有： 1 含 10％～20％胎牛血清的高糖或低糖 质干细胞结合 ，再用永久磁铁吸引出问充质干细胞。 DMEM／F12； 2 含 10％ 一20％ 胎 牛 血 清 的 后两种方法实验条件要求高，所需标本