尿液中α淀粉酶的提纯和性质研究.pdfVIP

临床检验杂志990101 临床检验杂志 JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY SCIENCE 1999年 第17卷 第1期 Vol.17 No.1 1999 尿液中α-淀粉酶的提纯及性质研究 ** 张晓洁 　孟泽 摘要　为了制备淀粉酶测定的参考品，从正常人尿液中提取了α-淀粉酶(Amy)并对其特性进行了研究。 该提制品淀粉酶的比活性达84.3 kU/g蛋白，几乎不含其它杂酶(测不到ALT、AST、LD、CK、GGT、 ChE、ALP活性浓度)。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条Amy区带。其催化特性和人血清Amy非常相 似，用亚乙基封闭的G -pNP(EPS)作底物，偶联多功能α-葡萄糖苷酶测定其米氏常数为0.189 mmol/L。 7 利用琼脂糖凝胶电泳，碘-淀粉显色，该提取物至少被分为S 、P 两条活性区带。本研究为今后进一步 2 2 研制淀粉酶测定参考品建立了基础。 关键词　α-淀粉酶；参考材料；尿 ZHANG Xiaojie,MENG Zei 210002) blocked G 7 enzymatic bands,S and P 2 2 for the measurement of α-amylase. Key words　α-Amylase；reference material；urine 　　淀粉酶(Amy，EC3.2.1.1)属水解酶类，分为α、β两类，人体中淀粉酶属α-淀粉酶，主要由胰腺和 唾液腺分泌。Amy活性的准确测定依赖于测定方法的标准化。Amy的测定方法不下200种，德国 测定方法。IFCC根据这一新体系，提出了Amy测定的参考方法。没有参考品或标准品，仍不能确定测 定结果是否正确。欧共体标准局(BCR)的CRM476是从人胰腺中提制的Amy参考品，其动力学特性与人 血清基本一致 ［1］ 。我国目前尚无酶参考品。由于胰腺取材困难，并且牵涉道义和法律问题，故我们采 用正常人尿液提取Amy。与从胰腺中提取淀粉酶相比，不仅取材方便，而且尿液和血清中Amy的成分基 本一致，为今后制备酶的参考品建立了基础。 1　材料和方法 1.1　仪器　由自动部分收集器(上海沪西生化仪器厂产，BSZ-160型)、核酸蛋白检测仪(浙江永嘉电器厂) 及海尔冷藏陈列柜等组装的层析系统。日立高速冷冻离心机(20PR-520)。日立7150型生化分析仪。DYY- Ⅱ型稳压稳流电泳仪和DYY-Ⅱ型琼脂糖水平电泳槽(北京六一仪器厂)。Beckman700分析系统。Mini- PROTEAN型垂直板型电泳仪(BIO-RAD公司)。透析浓缩装置(本室组装)。 file:///E|/qk/lcjyzz/lcjy99/lcjy9901/990101.htm（第 1／5 页）2010-3-23 3:18:43 临床检验杂志990101 过硫酸铵、硫酸铵、总蛋白标准液、顺丁烯二酸、可溶性淀粉、甘氨酸、巴比妥、巴比妥钠、磷酸盐、 醋酸盐、氯化钠及氯化钙等(均为国产)。 1.3　原材料　正常人的新鲜尿液约50 kg。 1.4　方法 ［1］ 的方法加以改进，步骤如下： 1.4.1　提纯方法　参考Gubem G等 　　收集正常人新鲜尿液约50 kg，3号砂芯漏斗减压过滤后，用透析浓缩装置将其浓缩。共得浓缩尿 2170 ml，pH接近7.0。用40%饱和度(NH)SO 沉淀后(室温、4小时)，4℃、6000×g离心25分钟，去上 4 2 4 清。用约200 ml含1 mmol/L CaCl 2