融合系统pH值对杂交细胞集落形成率影响.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijin二） 5(4);29-321983 融合系统pH值对杂交细胞集落形成率的影响 颇 永 衫 （中国科学院遗传研究所，北京） 在发现用灭活的仙台病毒为媒介可获得能 长良好，但都不能在 HAT选择培养基1N〔里生 传代的杂交体细胞以后，体细胞杂交就成为细 长。 胞生物学、遗传学、发育生物学、肿瘤学和病毒 2．同位素标记 当PG19细胞在培养基 学等领域一个很有用的研究手段，它被广泛地 里生长24小时后，在其培养基里加人氖化胸腺 应用于体细胞种内或种间遗传物质的转移、基 啥吮核昔 （比活为，居里／毫克分子，Sigma),最 因定位、基因表达过程中的核质关系、细胞重 终浓度为1微居里／毫升，然后继续在370C培 组、真核细胞基因的调节以及单克隆抗体等研 养36-40小时。 究。多年来，对于那些可能影响细胞融合率及 3．乳胶微粒标记 采用 Levine(1978) 杂交细胞形成的物理、化学和生物因素，例如， 的方法DI，即取0.1毫升 直（径为0.6#m）的乳胶 病毒本身的质量113、改变两亲本细胞的比例或 微粒贮存液，加MEM到100毫升，最终浓度为 融合前两亲本细胞的混合培养[3,81、融合过程的 5-6X10个‘乳胶粒／毫升。B82HTQ,细胞在 温度[4,151、加人植物凝集素1141等，均已有过报道。 上述培养基里生长2天 3（70C)，此时每个细胞 Croce等 （1972）报道过 pH对细胞融合率 含有50个以上的乳胶微粒。在细胞融合前，先 的影响刀〔。然而，在这些融合细胞中，异型核融 用Hanks液洗去未被细胞吸人的多余乳胶微 合细胞实际上只占其中的一小部分。一般认为 粒。 只有异型核双核细胞(di-heterokaryocytes)才有 4.实验组合 根据融合系统 pH值的不 可能形成杂交细胞[5,1610因此，提高异型核双核 同，本实验分为 pH5.4,6.8,7.0和7.9等4组， 细胞的比例和杂交细胞的集落形成率是体细胞 进行细胞杂交实验。为了探讨细胞融合过程对 杂交成功与否的关键问题。由于溶液pH的改 细胞存活率的影响，我们还设有相应pH值的 变可能引起细胞膜结构的改变1153，而细胞膜结 对照组，即除了不加仙台病毒外，其他处理与实 构的改变也许正是成功地进行细胞融合的重要 验组同。 条件之一[7［l。因此本实验用氮化胸腺吻吮核昔 生理盐水缓冲液的制备 溶液A:KH, 标记一个亲本细胞的细胞核，用乳胶微粒标记 PO,0.91克，NaCI8.0克，KCl0.2克，CaC1,· 另一个亲本细胞的细胞质，研究在细胞融合时 2H,00.13克，MgC1,·6H,01.11克，加蒸馏水 溶液pH 值对杂交细胞集落形成率的影响。 至1升。溶液B:Na,HP04·2H,00.10克，NaC1 8.0克，KCl0.2克，CaCI,·2H,0 0.13克， 材 料 与 方 法 吨Cl,·6H,00.1克，加蒸馏水至1升。此时溶 1．细胞株 亲本细胞B82HTQ,(TK-)n11 液A和溶液B的pH值分别为8.0和4.4。取适 和 PG19(HGPRT-)1111分别来源于小鼠的L- 当体积的溶液A和溶液B混合，用 pH计测定 细胞株和 C,BL黑瘤细胞。 两者在含有 10% Yan Yongchan:InfluenceofpH inFusion System 小牛血清的Eagle基础培养基 M（EM）中均生 onPlatingEfficiencyofH沙ridCells ·29 制备出声 分别为5.4,6.8,7.0和7.9的生理 Ip一PI＿ Ip一PI 盐水缓冲液