比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG.pdfVIP

第 16卷 第 2期 集美大学学报 (自然科学版) Vo1．16 No．2 2011年 3月 JournalofJimeiUniversity(NaturalScience) Mar．2011 [文章编号]1007—7405(2011)02—0087—05 郝 华 ，鄢庆枇 ，邹文政 ，纪 勇 ，2 (1．集美大学水产学院，福建 厦门361021；2．福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室，福建 厦f-j361021) [摘要]优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件，并与 A蛋白亲和层析法 比较纯化效果，以求 得到一种简便、快速、高效的纯化 IgG方法．结果表明：从 5只新西兰兔获得 210mL试管凝集效价高达 1：5120的兔抗鳗弧菌抗血清，磁珠与 IgG结合 10rain达到平衡，其最大结合量为0．227mg／mL；免疫磁珠 分离法与A蛋白亲和层析法得到的IgG纯度都很高，经过 SDS—PAGE电泳都只得到25ku和55ku左右的 两条带；免疫磁珠分离法得到的抗体ELISA效价高于A蛋白亲和层析法；免疫磁珠分离法反应所需时间 (10min)小于A蛋白亲和层析法所需的20min，其得率 (11．5mg／inL)也高于 A蛋 白亲和层析法的 1O．25mg／mL． [关键词]免疫磁珠；A蛋白亲和层析；抗体纯化 [中图分类号]S941．42 [文献标志码]A Purification ofIgG from RabbitSerabyImmunomagnetic BeadsandProteinA AffinityChromatography HA0Hua，YANQing—pi ，Z0UWen．zheng ，JIYong (1．FisheriesCoHege，JimeiUniversity，Xiamen361021，China；2．KeyLaboratoryofScienceandTechnologyfor AquacultureandFoodSafety (JimeiUmversiyt)，FujianProvince，Xiamen361021，China) Abstract：Anti—serawerepreparedfromrabbitbyinjectionofV／br／oanguillarumantigen，andthenthe IgGwaspurifiedfrom theanti--serabythemethodsofimmunomagneticbeadandproteinA affinitychromatog·· raphy．Theresultsshowed：210mLanti—serawithanagglutinationtiterof1：5120werepreparedrfom 5New Zealandrabbits．ThebondingofIgG andimmunomagneticbeadsreachedequilibrium within10min，andthe maximum bondingwas0．227mg／mL．Purified IgG exhibited twobandsinSDS—PAGE gel，themolecular weightofheavychainandlightchainofIgG were55kuand25ku，respectively．TheIgG purifiedbyimmu— nomagneticbeadsexhibitedhighertiterthanhtatpurifiedbyproteinA affinitychromatography．Theprocessof immunomagneticbeadsseparationcouldbefinishedwihtin 10minwhichwasshorterhtanthatofproteinA Sepharoseaffinitychromatorgaphy(20min)．TheIgGrecoveryefficacyofimmunomagneticbeadsmethod