慢病毒载体启动子对沼泽型与尼里拉菲水牛体细胞感染效率的影响.pdfVIP

抗病遗传育种与繁殖技术专题蟋》 301 T020033 慢病毒载体启动子对沼泽型和尼里拉菲水牛体细胞感染效率的影响宰 乔树叶康超李美青李湘萍石德顺 (广西大学动物繁殖研究所，广西南宁530005) 引言 慢病毒作为一种特殊的逆转录病毒，具有呵感染分裂细胞及非分裂细胞、能转染多种组织，包括早 期胚胎细胞：转移基因片段容量较大、能稳定整合和长期表达外源日的基因；不易诱发宿辛免疫反应等 优点。这些优点使得慢病毒载体法成为转基因动物方法学上的一个新的突破。至今为止，已成功得到慢 病毒载体介导的转基1人1小鼠、人鼠、黄牛、山羊及猫等动物。本研究选择含有不同启动子的慢病毒载体， 系统比较启动子对沼泽水牛和尼里拉菲水牛成纤维细胞感染效率的影响，以寻找针对水牛体细胞转基因 效率较高的慢病毒载体结构，为建立高效转移和高效整合的转基冈克隆水牛生产技术体系奠定基础。 材料和方法 包装、滴度测定。采用相同MOI慢病毒颗粒感染沼泽型水牛和尼里拉菲水牛成纤维细胞，以表达GFP基 因细胞阳性率及流式细胞分析技术比较慢病毒载体启动子对沼泽型水牛和尼里拉菲水牛成纤维细胞感 染效率的影响。 结果 (1)所有包装的含不同启动子的慢病毒载体均能感染沼泽型水牛和尼里拉菲水牛，但感染效率不 VS3．44％，Po．01)和平均荧光值(741．92VS612．82)均高于945(CMV)病毒感染组。 (2)同一结构的慢病毒载体感染尼里拉菲水牛成纤维细胞的效率均高于沼泽犁水牛成纤维细胞： VS1214．24，P0．01) 胞GFP阳性率(4．51％VS23．53％，尸0．01)相比差异显著，平均荧光值(389．16 也有明显的差异。 5．14％， P0．05)，无显著性差异。 结论 (1)不同启动子对慢病毒载体感染沼泽型水牛和尼里拉菲水牛成纤维细胞的效率不同； (2)人源和水牛源U6启动子慢病毒载体对沼泽型水牛和尼里拉菲水牛成纤维细胞具自．相当的感染 效率； (3)同一启动了慢病毒载体对尼里拉菲水牛成纤维细胞的感染效率普遍高丁二沼泽型水牛成纤维细胞。 参考文献(略) ·本研究得到国家转基因生物新品种培育重大专项课题No．2008zx08007．003、2009zx08007一009B及，“西岛校优秀人才项目资助。