结球甘蓝下胚轴原生质体培养再生植株.pdfVIP

alas．∽．cIl 园艺学报2011，38(增刊)：2548 http：／／V～伸r ActaHorticulturaeSinica 26．corn E-mail：yuanyixuebao@1 结球甘蓝下胚轴原生质体培养再生植株 黄 玲，钟新民奉，王五宏，李必元，岳智臣 (浙江省农科院蔬菜研究所，杭州310021) 对影响结球甘蓝下胚轴原生质体培养的主要因素进行研究，以初步建立适合结球甘蓝原生质体 游离、纯化、收集、培养以至再生出完整植株的实用技术体系，为结球甘蓝的非对称细胞融合及品 种改良与创新等研究奠定基础。 R．10)与果胶酶 以早熟犁结球甘蓝品种QL为材料，使用不同浓度组合的纤维素酶(Cellulase (Pectolase Y-23)混合酶溶液，对QL下胚轴进行酶解，游离纯化，分别计算所得原生质体产量及 脱氧一D一核糖0．125 g·L。+甘露醇45．5g·Lq+山梨醇45．5g·L-l+2．5g·L。1葡萄糖+水解酪 蛋白0．15g·L。1)作为原生质体培养摹，使用固液双层培养法进行原生质体培养。原生质体培养至 10 d时，观察原生质体分裂情况，并统计细胞分裂频率。培养至40d时，统计植板率，并开始将再 生微愈伤组织移至含不同激素的固体增殖培养基上培养。培养3—4周，待愈伤组织逐渐长大并转 绿后，将其分别移入不同分化培养基中进行芽分化培养，4周后观察并统计出芽率。分化的芽长至 1．5 d，再移入生根 cm左右长时，将绿芽或丛生芽切下，移至无激素的MS固体培养摹中生长7～10 0．2 培养基(1／2MS+IBA mg·L。1)中，于培养室中进行正常光照培养，使其生根，长成再生小植株。 3—4周后，取根系发达的再生植株进行正常炼苗，转移至温控玻璃温室中生长。 R．10+0．05％PectolaseY-23+9CPW+ 试验结果表明：(1)进行原生质体的游离，以2％Cellulase 5mm01．L-1 d苗龄的结球甘蓝下胚轴原生质体进行酶解， MES酶液组合的酶解效果最佳。其对4 16 h后对游离的原生质体进行纯化，得到原生质体产量为16．85×105个·g一，所获得原生质体活力 0．2 0．5 为86．3％。(2)在原生质体的培养及植株再生中，以B5改良培养基+NAA mg·L。+2,4．D 0．2 d后细胞分裂 rng·LJ+6．BAmg·L-1的原生质体培养效果最佳，采用固液双层培养的方法，10 0．025 0．025 频率与40d后植板率分别为20．8％和0．53％。由MS培养基添加NAAmg·L‘1+2，4·D 0．1 nag·L．1+6-BAmg·L。1对结球甘蓝下胚轴原生质体微愈伤组织增殖效果好。MS培养摹附加6-BA 2 O．5 mg·L～，zT mg·LJ对结球甘蓝下胚轴原生质体再生愈伤组织芽分化效果较佳。在结球甘蓝原 7．5nag