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HPV疫苗中和抗体以及保护效力的评价 中国食品药品检定研究院王佑春研究员 宫颈癌是危害女性健康的第二大恶性肿瘤，95％ 光的小鼠在每组中所占比例逐渐减少。当免疫剂量为 以上的宫颈癌病理组织中能够检测到HPVDNA，提 4ug时，5只小鼠中只有1只小鼠为可检测到荧光，且 示HPV感染是导致富颈癌的最主要原因，开发、研 荧光信号很弱。当免疫剂量增加至8ug时，5只小鼠均 制HPV预防性疫苗来是预防宫颈癌的最根本手段。 不能检测到荧光信号，疫苗在该免疫剂量下具有完全 目前已有两家HPV疫苗上市，分别是默克(Merck)公的保护作用。利用以假病毒为基础的中和抗体检测方 l感染的 法对血清中的HPV58型特异性的中和抗体进行检测， 司生产的可预防HPVl6，HPVl8,HPV6和HPVI 当血清终稀释度为l：20时，阴性对照组及各免疫剂 Gardasil四价疫苗和葛兰素史克(GSK)公司生产的针对 量组均检测不到HPV58型中和抗体。以上结果提示， HPVl6．HPVIamCervarix一-价疫苗。目前我国已有几家 单位在从事HPV疫苗的研究，一家单位的HPV候选疫由于L2类疫苗的血清中的中和抗体滴度较低，利用现 苗已进入临床试验阶段，如何对候选疫苗进行评价， 有的方法检测不到，因此血清中的中和抗体滴度与保 特别是疫苗效力的评价，是摆在我们面前迫切需要解 护作用的相关性分析较为困难，因此我们试图在今后 决的问题。疫苗效力评价分为体外和体内两方面， 的工作中找到血清中的抗体水平与保护作用的关系， HPV疫苗发挥其保护作用主要是通过诱导机体产生针 将总抗体滴度作为疫苗的间接评价指标。利用ELISA 对HPV的中和抗体来实现的，体外评价则是通过检测 法测定血清中HPV的总抗体水平。其中阴性对照组和 疫苗接种后免疫血清中的中和抗体水平来对疫苗的效 lug免疫剂量组小鼠血清的HPV总抗体滴度均小于40， 力进行初步检测。另一方面，要想对疫苗的保护性进 2ug、4ug和8ug剂量组的平均抗体滴度分别为1904， 行进一步分析，还需要建立合适的动物模型检测疫苗 接种后抵御病毒感染的能力，对疫苗进行体内评价。 量组与阴性对照组血清抗体滴度的差异具有统计学意 本室建立了假病毒为基础的体外中和抗体评价方法和 假病毒小鼠生殖道感染模型，并初步应用于HPV免疫 原性分析和部分疫苗的临床前研究。 剂量组抗体滴度高，且差异具有统计学意义(F4ug．2u。 中和抗体体外评价方法的建立，共制备了六型 (HPvl6，HPVl8，HPV58，HPV45，HPV6，HPVll)HPV 8ug剂量组抗体滴度之间的差异无统计学意义(Fsug—岵 假病毒，并建立了各型中和抗体检测体系，且方法的 =o．14，P0．05)。以上研究结果显示，抗体滴度随着 线性、线性范围及灵敏度等指标均较好；假病毒小鼠 免疫剂量的增加而逐渐升高，且与疫苗的保护效果之 间存在对应关系，在本研究中，当抗体滴度大于等于 生殖道感染模型的建立，共制备了HPVl6、HPV58、 HPV45和HPV6四种型别的假病毒，并建立了四种假病l：25000时，小鼠体内检测不到荧光信号，能够保护 ID50， 机体不受假病毒的感染。 毒小鼠感染模型且确定了假病毒感染量为5～10 即106TU左右。 L1类疫苗：我们研究的对象是昆虫细胞中表 找到L1类和L2类HPV预防性疫苗诱导的中和抗体达并纯化的L1VLP。将3个剂量(0．2ug、0．04ug、 滴度与各自的保护效果之间的关系。 O．00Bug)腹腔免疫小鼠，每组5只，用小鼠假病毒感染 L2