山核桃组织培养的初代培养技术的研究.pdfVIP

alas．ac．cn 园艺学报2011，38(增刊)：2492 http：／／Ⅵw帽r ActaHorticulturaeSin／ca 26．com E—mail：yuanyixuebao@1 山核桃组织培养的初代培养技术研究 俞飞飞·，江 芹，孙其宝，刘 茂 1) (安徽省农业科学院园艺研究所，合肥23003 山核桃(Caryacathayensis)常规扦插难于生根，嫁接成活率低而不稳，另外山核桃成枝能力较 弱，枝条生长缓慢，接穗量远不能满足嫁接繁殖需要。本试验中结合山核桃冬季修剪，选取当年生 健壮枝条为材料，研究其初代培养过程中外植体灭菌和防止褐变的措施，为进一步开展组培研究奠 定基础。 将剥去外叶的休眠芽用清水冲洗后，放入装有洗洁精饱和水溶液的杯中，不停摇晃10mill左右， min。 再用软毛刷反复刷洗，最后用流动的自来水冲洗30 外植体材料不同灭菌处理：在超净工作台上外植体用70％酒精处理30s后，然后分别采取不同 min，无菌 min，用无菌水冲洗3次，再用0．1％HgCl2浸泡15 灭菌处理。A：用0．1％HgCl2浸泡10 水冲洗3～4次：B：用0．1％HgCl2浸泡25min后，用无菌水冲洗3～4次；C：用0．1％HgCi2浸泡 10 rain，然后用无菌 min，用无菌水冲洗3次，除去外面包裹的部分鳞片，再用0．1％HgCl2浸泡15 水冲洗3～4次。将灭菌后的休眠芽除去外面包裹的鳞片，切取茎尖生长点接种在初代培养基 (1／2MS+2 PVP+0．1 mg·L～6．BA+2g-L。1 mg·L_N从)上，观察灭菌效果。 灭菌后不同抗氧化剂溶液保存处理：将上述A方法灭菌处理后的外植体材料分别放入无菌0．2％ Na202S3溶液和过滤灭菌的0．03％维生素C溶液中，以放入干净培养皿中为对照，接种时从溶液中取 MS+2 PVP+0．1 出置于初代培养基(1／2 NAA)上观察褐变情况。 mg·L～6．BA+2g·L．1 mg·L。1 培养基中不同附加成分对褐变的影响：以1／2MS为基本培养基，分别加入活性炭(AC)、PVP、 维生素C，以不加附加物的基础培养基为对照，采用上述A方法灭菌处理后的外植体材料接种，比 较不同抗氧化剂和吸附剂对外植体材料褐变的影响。 生长调节剂对外植体生长及褐变的影响：将上述A方法灭菌处理后的外植体材料放入无菌0．2％ 2 2 2 Na202S3溶液中，随取随用，以1／2MS+PVPg·L1+ACg·L。1+GA3nag·L以为基本培养基， 分别加入不同浓度的6．BA和NAA组合，比较其对初代培养生长及褐变的影响。 500～2000 培养条件：温度(254-2)℃恒温，光照l 5．3～5．8，糖30 Ix，pH g·L．1，琼脂7g·L．‘， h·d一，30 初代培养在黑暗条件下培养8d后取出进行光培养，光照时间12 d后观察统计结果。