TaqMan荧光定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立.pdfVIP

家禽生产与禽病防治专题．蟋》 585 密切的亲缘关系。经培育而成的细胞适应毒HQ株在致病性上大大减弱，在分子水平上也发生了核苷酸 与氨基酸的变化，出现了致弱毒株的分子特征，但该毒株仍保留有超强毒株的某些特性，抗原性和免疫 原性没有发生根本改变，且对DF．1细胞表现更为敏感，出现病变更快、毒价更高，因而可将它在DF-I 细胞上、生物反应器上大量繁殖，制各法氏囊灭活疫苗，更好为生产服务。 参考文献：(略) T040057 TaqMan荧光定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立 马震原李刚 (中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193) 引言／目的 鸡产蛋下降综合征(Eggdrop 的减蛋综合征病毒引起的造成产蛋鸡产蛋下降及卵壳形成不全等临床症状的一种禽类传染病，李刚等于 1991证实了EDS在我国大陆的存在。目前对EDS的实验室诊断方法主要归为病原学方法，基于抗原抗体 反应的血清学方法，病毒核酸检测方法。本研究建立的1铀Mall荧光定量PCR方法能够更早地检测病原， 可以动态地反映出病原在体内的分布情况，更加快速、灵敏、准确、特异，为减蛋综合征进一步地研究 提供了一定的技术基础。 材料方法 本实验根据GenBank中公布的减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的高度保守序列，设计了2对特异性 引物和I条TaqMan荧光探针。以构建的阳性重组质粒为标准品，绘制标准曲线，进行该方法敏感性、特 异性、重复性和稳定性的测定，并将其运用到临床样品检测当中。 结果 围之间具有良好的线性关系，重复性和稳定性较好，变异系数均小于2．5％。以鸡传染性贫血病毒、鸭 瘟病毒、马立克病毒等DNA病毒模板进行特异性试验，均检测不出。 讨论 Green I染料法的特异性 也高于曾经报道方法的敏感性。用TaqMan探针进行荧光定量PCR克服了SYBR 差、荧光本底高等问题。构建的标准质粒所含的EDSV特异性片段，选自于EDSV六邻体蛋白基因序列上 及配套引物特异性强且非常稳定，与其他病毒核酸没有交叉反应。在组内及组间重复性试验中，本实验 采用所有浓度梯度的标准模板进行检测，CV值均小于2．4％，说明本实验建立的方法针对不同样本都有足 够的数据可信度。在进行临床攻毒组样品检测时发现，荧光定量PCR的阳性检出率达到100％，而常规PCR 测不出，结果说明了荧光定量PCR在感染早期样本或者微量样本检测中的优势。 参考文献(略)