STIM1%2fOrai1介导的钙离子内流参和气道平滑肌细胞增殖.pdfVIP

1(第十二次仝围呼吸病学学术会议)论文汇编 书面交流 中华医学会呼吸病学年会一201 P2Y2受体在支气管哮喘豚鼠中性粒细胞 防御素表达中的作用 何仁忠，朱黎明 湖南省马王堆疗养院呼吸内科410016 目的研究支气管哮喘豚鼠中性粒细胞防御素(RNP)的表达及P2Y2受体对其表达的影响。 方法成年雄性豚鼠72只随机分成正常组(A)和哮喘组(B)，每组36只，以腹腔内注射联合雾化吸 入卵清蛋白(OVA)复制哮喘模型，乙酰甲胆碱激发试验确定哮喘模型复制成功；再将哮喘组及正常组 织中的表达；RT—PCR检测肺组织中RNP、P2Y2mRNA表达含量。 结果 及P2Y2mRNA呈现正相关。 结论RNP在支气管哮喘豚鼠中表达增高：豚鼠RNP表达可能与P2Y2受体有关。 STl i MI／Ora 1介导的钙离子内流参与 气道平滑肌细胞增殖 邹进晶…巾1，高亚东n1，耿爽幢1，杨炯比 l武汉大学人民医院呼吸科430061 2武汉大学中南医院呼吸科 目的哮喘是临床常见的慢性气道炎症性疾病，其主要特征是气道慢性炎症，气道高反应性和可逆性 smooth 气道阻塞，并且进展出现气道壁的结构重建和进行性肺功能下降。气道平滑肌细胞(airway musclecells，ASMCs)增生是慢性哮喘患者的一个特征性病理变化，但是触发这一病理过程的机制 尚未明确。细胞内ca2+浓度在气道平滑肌收缩舒张和增殖等多种功能调控中发挥关键作用。胞浆内 中华医学会呼吸病学年会-2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编 书面交流 钙离子来源于两个方面，一是胞浆内质网储存钙离子释放，一是细胞外高浓度钙离子通过细胞膜表 reticulum，ER／SR) 面钙离子通道内流。细胞内肌浆网或内质网(sarcoplasmareticulum／endoplasmic 内的储存钙清空同时也可以开放细胞膜上的SOC(Store—operatedCa”，SOC)通道产生细胞外Ca2+ 内流，称为SOCE(Store—operated 肌细胞钙信号和细胞生理反应过程中发挥了重要作用。研究已发现并证实STIMI(Stromal interactionmolecules 通过调控SOCE参与血管平滑肌细胞的增殖和迁移。但是目前还没有研究证实STIMI／Orail在调控 大鼠气道平滑肌细胞增殖。 方法将雄性SD大鼠支气管平滑肌组织在解剖显微镜下分离，消化酶消化，然后加入含10％胎牛血 清的DMEM培养基置于培养瓶中进行体外原代细胞培养，3—6代细胞用于实验研究。采用Fluo一3／AM 荧光染料进行胞浆内钙离子染色，然后用激光共聚焦系统观察胞浆内荧光强度实时变化，测定细胞 方法检测目的基因蛋白水平表达。AlamarBlue还原法和台盼蓝细胞计数法同时用于检测细胞增殖速 率。特异性shRNA的用于目的基因mRNA干扰沉寂，红色荧光蛋白作为转染标记蛋白，接有红色荧光 蛋白的质粒作为shRNA载体，通过Lipfectamine2000转染入细胞。转染后的细胞经流式细胞仪分 选，回收发红色荧光的成功转染细胞进行mRNA和蛋白水平抑制效果鉴定以及细胞增殖速率检测。 结果研究发现(1)血清刺激的增殖期气道平滑肌细胞与无血清刺激的静止期细胞相比，毒胡萝卜 mRNA 素(Tapsigargin，TPG)激发的SOCE明显增强，并且同时伴有STIMImRNA表达轻度上调和Ora