鸡毒支原体licA基因的真核表达.pdfVIP

上海市畜牧兽医学会2011 年学术年会论文集  鸡毒支原体licA基因的真核表达 陈丹清，陈鸿军，沈欣悦，于圣青，仇旭升，丁 铲 （中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241 ） 摘 要：鸡毒支原体licA基因编码脂寡糖/脂多糖（lipooligosaccharide /lipopolysaccharide, LOS/LPS ）合酶或胆 碱激酶，催化合成磷酸胆碱。该产物是支原体表面脂质的主要组成部分，与其致病性密切相关。鸡毒支原体 的licA基因位于hmw3-licA- mgc2-gapA-crmA-crmB-crmC粘附素基因簇内部。为深入研究licA基因及其产物的生 物学活性，本研究对鸡毒支原体licA基因进行了真核表达，通过间接免疫荧光试验检测，结果发现LicA 主要定 位于杆状病毒和DF1细胞浆中，并不对Sf9和DF1真核细胞具有明显的毒性。这为下一步在体外建立LicA 生物 学活性检测的模型奠定了基础。 关键词：鸡毒支原体；licA基因；真核表达 EUKARYOTIC EXPRESSION OF LICA IN MYCOPLASMA GALLISEPTICUM CHEN Dan-qing, CHEN Hong-jun, SHEN Xin-yue, YU Sheng-qing, QIU Xu-sheng, DING Chan （Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241,China ） Abstract: The licA gene of Mycoplasma gallisepticum encodes lipooligosaccharide / lipopolysaccharide synthase, or choline kinase catalyzing choline to phosphorylcholine, which is the major component of membrane lipids, and is associated with the pathogenicity of mycoplasmas. In this study, the licA gene in the adhesion genes cluster (hmw3-licA- mgc2-gapA-crmA-crmB-crmC) was amplified and subcloned into Bac-to-Bac Baculovirus eukaryotic expression system and pcDNA3.1 vector. By western blot analysis and indirect immuno fluoscence assay, the LicA protein was successfully expressed and sublocalized in the cytoplasma of the transfected Sf9 and DF1 cells without cytotoxicity. In vitro research on the biological activity of LicA will be carried out in future. Key words: Mycoplasma gallisepticum; licA gene; eukaryotic expression 鸡毒支原体感染，又称为鸡慢性呼吸道疾病（chronic respiratory disease, CRD ），是由鸡毒 支原体（Mycoplasma gallisepticum, MG ）引起的一类传染病，临床上以呼吸道症状为主，常 导致幼雏的死淘率上升和成年鸡的产蛋率下降，是造成养鸡业严重经济损失的主要疾病之一 [1] [2] 。MG感染和寄生最重要的步骤是牢固黏附在机体呼吸道黏膜固有层 ，与黏附或与毒力相 关的黏附素主要有VlhA多基因家族、GapA、MGC2 、PvpA 、CrmA、CrmB 、CrmC等。除了 上述黏附素以外，