隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建与在Hela细胞中的表达.pdfVIP

上海市畜牧兽医学会 2011 年学术年会论文集  隐孢子虫鼠基因型 CP15 基因真核表达质粒的 构建及在 Hela 细胞中的表达 1, 2 1 2 2 2 2 苏庆美 ，何生虎 ，米荣升 ，张国恩 ，黄 燕 ，周 鹏 ， 2 2 2 秦培兰 ，呼高伟 ，陈兆国 （1.宁夏大学农学院，银川 750021 ；2. 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学 重点开放实验室 中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海200241 ）1 摘 要：为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15 基因重组真核表达质粒，检测其重组质粒在Hela 细胞中的表达。采用 PCR 法，从pMD18-T-CP15 菌液中扩增了CP15 及含寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN ）的CP15 基因，酶切测序鉴定； 将该基因亚克隆至pVAX-1 载体中，用脂质体介导的方法转染Hela 细胞，RT-PCR 法、间接免疫荧光法和Western blot 法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示，扩增了约360 bp 和380 bp 的隐孢子虫鼠基因型CP15 和含CpG-ODN 的 CP15 基因，酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15 和含有CpG-ODN 的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15 。转染 Hela 细胞后，用RT-PCR 法检测到外源基因有效的转录，用间接免疫荧光、SDS和Western blot 法检测到外源 基因的有效表达。结果表明，构建的重组真核表达质粒能够在Hela 细胞中成功转录和表达，并且表达产物具有良好 的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。 关键词：隐孢子虫鼠基因型；CP15；真核表达质粒；Hela细胞；表达 CONSTRUCTION OF EUKARYOTIC EXPRESSION PLASMIDS WITH CRYPTOSPORIDIUM MOUSE GENOTYPE CP15 GENE AND THEIR EXPRESSION IN HELA CELLS 1,2 1 2 2 2 2 SU Qing-Mei ，HE Sheng-Hu ，MI Rong-Sheng ，ZHANG Guo-En ，HUANG Yan ，ZHOU Peng ， 2 2 2 QIN Pei-Lan ，HU Gao-Wei ，CHEN Zhao-guo （1. College of Agriculture，Ningxia University ，Yinchuan 750021 ，China；2. Animal-borne Food Safety Research Center of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of Animal Parasitology of the Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China） Abstract : In order to construct recombinant expression plasmids of Cryptosporidium mouse genotype CP15 gene and express in Hela cell, CP15 gene and CP15 gene containi