NALP3富含亮氨酸重复序列结构域识别人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(1)：121-127 · 121 · [文章编号] 1000—4718(2013)01-0121-07 NALP3富含亮氨酸重复序列结构域识别 人细胞周期蛋 白H和禽冠状病毒蛋白，I： 颜 亮 ， 罗 滔 ， 蔡军伟 ， 毕志斐 ， 胡巢凤 (暨南大学医学院病理生理学教研室 ，国家中医药管理局病理生理学实验室，广东 广州510632； 。南方医科大学病理生理学教研室，广东 广州 510515；山西医科大学人体解剖学教研室，山西 太原 030001) [摘 要] 目的：寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列(1eucine—richrepeat，LRR)结构域相互作用的蛋白质分 子。方法：克隆NAIX3富含亮氨酸重复序列(NALP3一LRR)结构域的DNA序列并经测序检验。应用酵母双杂交技 术，构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母双杂交载体，对人胚肺eDNA文库进行杂交筛选，经酵母回交实 验验证蛋白质在酵母细胞内的相互作用并对阳性克隆的DNA进行序列测定和生物信息学分析。将筛选到的阳性 克隆进一步用免疫共沉淀实验验证 NALP3一LRR结构域与阳性蛋 白之间相互作用的可靠性。结果：成功克隆 NALP3．LRR结构域的DNA序列并经测序检验正确。用酵母双杂交技术对人胚肺eDNA文库进行酵母杂交筛选共 获得4个阳性克隆。免疫共沉淀实验证实能与NALP3一LRR结构域发生相互作用的阳性蛋 白是人细胞周期蛋白H 和禽传染性支气管炎病毒株Cal99的ORF1a。结论：NALP3的富含亮氨酸重复序列结构域能与人细胞周期蛋白H 和禽冠状病毒蛋白发生相互作用。 [关键词] NALP3蛋 白；富含亮氨酸重复序列；人细胞周期蛋白H；禽传染性支气管炎病毒；酵母双杂交系 统 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．01．021 RecognitionofHomosapienscyclinH andavian infectiousbronchitisvi- rusbyleucineriehrepeatdomain ofNALP3 YANLiang ，LUOTao一，CAIJun．wei，BIZhi．fei，HUChao．feng (Depa~memofPathophysoilogy，LaboratoryofPathophysoilogy，StateAdministrationofTraditoinalChineseMedwine， SchoolofMedwine，JinanUniversity，Guangzhou510632，China；DepartmentofPathophysoilogy，SouthernMedwalUni— versity，Guangzhou510515，China；Department ofAnatomy，ShanxiMedwalUniversity，Taiyuan030001，hCina． E-moil：tyl@jnu．edu．on) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheproteinsthatinteractwiththedomainofleucine-richrepeatsinNALF3 (NALP3-LRR)．METHODS：TheDNAsequenceofNALP3-LRRdomainwasclonedandverifiedbyDNAseuqencing． Usingyeasttwo—hybridsystem，theplasmidofNALP3一LRR—pSos88baitwasconstructedtoscreenhteeDNA libraryofhu． mna embryoniclung．Thepositivecloneswereverifiednadselectedbytheme~odofyeastbaekerossverification．Co—im- munop