rAAV2-NTF2对糖尿病大鼠血视网膜屏障的保护作用.pdfVIP

中国痘理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(4)：759—763 · 759 · [文章编号] 1000—4718(2009)04—0759—05 rAAV2一NTF2对糖尿病大鼠血视网膜屏障的保护作用 史 煜 ， 李 斌， 李 涛， 曹 亮， 李永浩， 马红婕， 谢 琳， 唐仕波 (中山大学中山眼科中心，眼科学国家重点实验室 ，广东 广州510060) [摘 要】 目的：观察2型重组腺相关病毒一核运输因子2(rAAV2一NTF2)对糖尿病大鼠血视网膜屏障功能 损伤的拮抗作用。方法：伊凡思蓝(EB)灌注铺片观察糖尿病大鼠视网膜血管分布和形态。亚克隆构建 pSNAV— NTF2载体，腺相关病毒包装形成 rAAV2一NTF2。成年雄性 Wistar大鼠，以右眼为实验眼，玻璃体腔注射4IxL rAAV2一NTF2，左眼为对照眼，玻璃体腔注射rAAV2一增强型绿色荧光蛋白(EGFP)4IxL。1个月后取4只大鼠左 眼，固定后取视网膜制备全视网膜铺片，荧光显微镜下观察 EGFP表达情况。再行STZ腹腔注射诱导糖尿病，同时 设单纯糖尿病组 (diabetes，D组)和正常组(normal，N组)。糖尿病 1个月后以45ms／kg剂量静脉注射EB，循环2h 后 1％多聚甲醛枸橼酸缓冲液灌注并摘除眼球取视网膜，置于甲酰胺中浸泡提取染料，用分光光度计测量甲酰胺中 染料的浓度。结果：正常组大鼠可见在低背景荧光下视网膜血管对 EB有很好的屏障作用，糖尿病2周大鼠视网 膜血管仅见背景荧光增强，糖尿病 1月后血管出现异常节段性扩张，局部血管周围EB渗漏。糖尿病 1个月大鼠视 网膜内EB浓度是正常组 的4．67倍 ，P0．01，提示糖尿病大 鼠血 一视网膜屏障受损。玻璃体腔注射rAAV2一 NTF2，视网膜内EB浓度为 (8．304-4．16) s／g视网膜干重，较对侧眼(22．13-48．43) g视网膜干重明显减少 ，可 以部分改善血一视网膜屏障的破坏，降低 EB一白蛋白渗漏 (P0．05)。结论：玻璃体腔注射 rAAV2一NTF2可减 轻糖尿病大鼠视网膜血一视网膜屏障功能的破坏，为糖尿病视网膜病变的基因治疗提供了实验依据。 [关键词] 糖尿病视网膜病变；核运输因子2；腺相关病毒；血一视网膜屏障 [中图分类号] R363 [文献标识码] A ProtectiveeffectofrAAV2——NTF2 on blood——retinalbarrierdamagein diabeticrats SHIYu，LIBin，LITao，CAOLiang，LIYong—hao，MAHong—jie，XIELin，TANGShi — ． bo (StateKeyLaboratoryofOphthalmology，ZhongshanOphthalmicCenterofSunYat—senUniversity，Guangzhou510060， China．E—mail：tangsb@mail．sysu．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：ToexploretheeffectofrAAV2一NTF2ontheblood—retinalbarrierdamageinearlystage dibaeticretinopathy．METHODS：RetinalvasculaturewasobservedbyEvansblue．NTF2genewasclonedintoadeno— associatedvirusvectorpSNAV．TherecombinantpSNAV —NTF2wastransfectedintoBHK cells．Afterpurification，high — titerrAAV2一NTF2．rAAV2一NTF2atdoseof4IxL (titer1．0×10 )wereinjectedintolefteyesandrAAV2一EGFP atthesamedoesandtiterwereinjectedintotherighteyesof36rats．Mter1month，dibaetesmellituswereinducedby