siRNA沉默转酮醇酶样蛋白1基因对人肝癌HepG2细胞生长微环境的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(8)：1383—1387 · 1383 · [文章编号] 1000—4718(2012)08—1383—05 siRNA沉默转酮醇酶样蛋 白1基 因对 人肝癌 HepG2细胞生长微环境的影响 张德太 ， 左曙荣， 杨 文， 张 科， 宋 斌 ， 涂启明 (华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科，湖北 武汉430022) 【摘 要] 目的：通过siRNA技术沉默肝癌细胞系HepG2转酮醇酶样蛋白1(TKTL1)基因后观察其对生长微 环境中乳酸生成水平、还原型谷胱甘肽 (GSH)水平及NADPH／NADP 比值的影响，旨在探讨肿瘤细胞 TKTL1表达 与其转移特性的内在联系。方法：用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HepG2细胞株，RT—PCR 检测TKTL1mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率；以未转染 HepG2细胞为对照，进一步观 察 TKTL1沉默的癌细胞内乳酸生成水平、GSH含量、NADPH／NADP 比值及葡萄糖 一6一磷酸脱氢酶(G一6一PD) 活性的变化。结果：siRNA沉默 HepG2细胞 TKTL1基因后TKTL1mRNA表达下降、TKT活性显著降低 (P 0．01)，乳酸生成、GSH水平及NADPH／NADP 比值较对照组细胞均显著降低 (P0．01)，但G一6一PD活性无明显 变化(P0．05)。结论：肿瘤可能通过TKTL1高表达调整葡萄糖代谢从而改变乳酸及氧化自由基生成，使细胞生 长微环境利于肿瘤转移。 【关键词】 RNA，小干扰；转酮醇酶样蛋白1；葡萄糖 一6一磷酸脱氢酶 ；HepG2细胞 [中图分类号] R735．3 [文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．08．008 EffectsofTKTL1silencingbysiRNA on growthmicroenvironmentofhu- manhepatocellularcarcinomaHepG2cells ZHANGDe—tai，ZUOShu—rong，YANGWen，ZHANGKe，SONGBin，TUQi—ming (DepartmentofLaboratoryDiagnosis，Union．Hospital，Tong#MedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceTechnolo- gY，Wuhan430022，China．E—mail：Detaizhangwh@163．corn) A『BSTRACT] AIM：Toexploretherelationshipbetweenhteexpressionoftransketolase—like1protein(TKTL1) andthemetastasisofhepatocellularcarcinomabyinvestigatinghtechangeofsomeindicatorsingrowth eludinglactateproduction，reducedglutathione(GSH)levelnadratioofNADPH／NADP inhepatocellularcarcinomacell lineHepG2aftersilencingofTKTL1expressionbysiRNA．METHODS：SpecificsiRNAexpressionvectortargetingTKTL1 genewasconstructednadtransfectedintoHepG2eellline．Theeffectof silencingwasevaluatedbydetectingthe mRNAlevelnadtheactivityoftrnasketolase(TKr几1)．Thechnagesoflactateproduction，GSHlevel，theratioofNAD- PH／NADP an