siRNA特异性沉默septin2基因抑制大肠癌LoVo细胞迁移.pdfVIP

· 1362· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(8)：1362—1366 [文章编号] 1000—4718(2012)08—1362—05 siRNA特异性沉默 septin2基因 抑制大肠癌 LoVo细胞迁移 代新珍 ， 黄学平 ， 钟 琳 ， 陈少红。， 韩西群 ， 张 玉 ， 朱梅刚 ， 赵 彤 (南方医科大学 附属南方医院病理科 ，基础医学院病理学系，广东 广州510515) [摘 要] 目的：检测新型骨架蛋白septin2在不同转移能力的人结直肠癌细胞株中的表达水平，探究其在 结直肠癌细胞迁移中的作用。方法：采用实时荧光定量RT—PCR及Westernblotting检测 septin2基因及其蛋白在 高转移潜能细胞株LoVo和低转移潜能癌细胞株 HT一29、SW480、HCT一116中的表达 ；用 siRNA干扰方法沉默高 表达的septin2基因，实时荧光定量 RT—PCR检测干扰效率，免疫荧光共聚焦实验观测干扰前后septin2蛋白表达 的变化，划痕实验检测干扰前后细胞的迁移能力。结果：septin2在 LoVo细胞 的表达水平显著高于 HT一29、 SW480及HCT一116细胞(P0．05)。沉默sept 2基因后，LoVo细胞 septin2mRNA表达降低(P0．05)；septin2 与纤维状肌动蛋白(F—actin)存在共表达；F—actin表达减弱，应力纤维减少，片状伪足细而短；细胞迁移能力减 弱。结论：septin2基因在 LoVo细胞高表达，干扰其表达能导致细胞骨架重构，从而降低细胞迁移能力。 [关键词] Septin2；LoVo细胞 ；细胞骨架 [中图分类号] R735 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．08．004 Inhibitoryeffectsofseptin2genesilencing induced bysiRNA on migra- tionofhuman colorectalcancercelllineLoVo DAIXin—zhen ，HUANG Xue—ping ，ZHONG Lin ，CHEN Shao—hong ，HAN Xi— qun ，ZHANG Yu ，ZHU Mei—gang ，ZHAOTong’ (DepartmentofPathology，NanfangHospital，DepartmentofPathology，SchoolofBasicMedcialScience，SouthernMedi— calUniversity，Guangzhou510515，China．E—mail：zhaotongketizu@126．corn) [ABSTRACT] AIM ：Toinvestigatetheexpressionofseptin2inhumancolorectalcancercelllinesandtheeffect ofseptin2onthecapacityofmigrationofhumancolorectalcancercelllineLoVo．METHODS：Real—timefluorescence quantitativeRT—PCR andWestern blottinganalysiswereusedtodeterminehtemRNAandproteinlevelsofseptin2indif- ferentmetastaticpotentialcelllines．respectively．Theexpressionofseptin2inL0VocellswassilencedbysiRNA．Theef- ficacyofsiRNA wasconfirmedbyreal—timefluorescencequantitativeRT—PCR．Septin2na ditsco—localizationwithF — actinweremeasuredbyimmunofluore