Thy-1及Thy—1mRNA在肺纤维化大鼠肺组织中的表达及相关性研究.pdfVIP

· l640· 理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2 (墨)； 二 [文章编号】 10130-4718(2009)08—1640一o4 · 短篇论著 · Thy一1及 Thy—lmRNA在肺纤维化大鼠肺 组织中的表达及相关性研究术 张晓荣 ， 吕长俊 ， 王晓芝 ， 崔 剑 ， 高福泉 ， 郝 东 ， 王 涛 ， 李洪波 (滨州医学院附属医院呼吸内科，山东 滨卅I256603；山东省立医院，山东 济南 250021) [摘 要】 目的：以博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠为动物模型，研究胸腺细胞分化抗原一1(thymocytedif- ferentiationantigen1，Thy一1／CD90)及Thy一1mRNA的表达，分析Thy一1及Thy一1mRNA与肺纤维化形成之间的 关系，为研究肺纤维化的发病机制提供新的思路。方法：将大鼠随机分为实验组及对照组，用 BLM气管注入法建 立动物模型；分别留取第 1d、3d、7d、14d、28d肺组织，测定羟脯胺酸(HYP)、Thy一1、Thy一1mRNA的表达情况。 结果：正常肺间质中成纤维细胞多数表达Thy一1，阳性率为88．O1％+4．12％；随着纤维化程度加重，Thy一1表达 呈进行性减少；Thy一1表达阳性率与HYP之间呈负相关；Thy—lmRNA在肺纤维化形成过程中无明显变化，与Thy 一 1表达之间无相关性。结论：在肺纤维化形成过程中存在成纤维细胞表达Thy一1减少，Thy一1细胞可能是胶原 的主要来源细胞；Thy一1的减少与Thy一1mRNA无关。 [关键词] Thy一1／CD90；肺纤维化 [KEYWORDS] Thy一1／CD90；Lungfibrosis [中图分类号] R363 [文献标识码] A 特发性肺纤维化 (idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF)是指 剂购 自武汉博士得生物试剂有限公司。 特发性间质性肺炎中(idiopathicinterstitialpneumonia，IIP)病 2 方法 理表现为普通型间质性肺炎的一种类型，该病为一种独立的 2．1 模型建立及标本处理 按H介绍方法采用气管内注入 高致死性疾病 ，确诊后平均5年生存率不足70％…。目前 BLM的方法制备动物模型 (BLM组)，对照组气管内注入同 IPF的发病机制尚不明确，成纤维细胞在其中起着关键性的 等剂量生理盐水 (Ns组)，留取 l0只正常大鼠，设为实验第0 作用。研究证实成纤维细胞具有异质性。根据细胞表面有 d(control组)。分别于注药后第 1d、3d、7d、14d、28d随机 无Thy一1的表达，可以把成纤维细胞分成Thy一1+和Thy一1 放血处死实验组及对照组大鼠各8只。取右肺上中肺叶放入 2种亚群 jj。国外已经有报道 2个亚群在细胞形态、增殖能 经DEPC水处理的4％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，备做病 力、对细胞因子的反应程度等方面存在不同，但对此方面的 理、Thy一1蛋白及mRNA测定；右肺中下叶肺组织备做HYP测 研究 目前以体外实验为主；国内尚未见此方面的报道。本实 定。 验以博莱霉素 (bleomyein，BLM)致肺纤维化大鼠为动物模 2．2 肺组织中羟脯胺酸含量测定 采用对二甲氨基苯甲醛 型，动态研究了肺纤维化形成过程中成纤维细胞Thy一1表达 的方法，按 文献 介绍步骤，测定肺纤维化形成过程中不同 的变化规律及Thy一1表达与Thy一1mRNA之间的关系。 时间点(注药后第 1d、3d、7d、14d、28d)羟脯胺酸含量。 2．3 免疫组化测定肺组织Thy一1蛋白表达 4％多聚甲醛 材 料 和 方 法 固定，石蜡包埋，常规连续切片，厚度5trm，操作步骤按说明 1 材料 书进行；同时加做波状蛋白(vimenfin)和 C