PDXI联合NKX6．1促进骨髓间充质干细胞分化为胰岛β样细胞.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2005，25(8)：1591—1599 · 159l · [文章编号] 1000—4718(2009)08—1591—09 PDXI联合 NKX6．1促进骨髓间充质 干细胞分化为胰岛 I3l样细胞 唐小龙， 张 洹 ， 朱康儿， 郭 敏 (暨南大学医学院血液病研究所，广东 广州 510632) [摘 要] 目的：为提高骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胰腺31样细胞的分化效率，以产生足够用于移植的胰 岛样细胞。方法：构建含PDX1与NKX6．1双基因的重组腺病毒载体，用重组腺病毒感染并联合多种细胞因子分 步诱导BMSCs。用RT—PCR、Westernblotting等多种方法分别检测PDXI、NKX6．1、胰岛素及 C一肽表达情况；观测 植入鼠肾包膜下的细胞形态与胰岛素 、C一肽等相应分子表达情况以及检测植入细胞对糖尿病模型大鼠的血糖水 平的调节能力。结果：BMSCs经重组腺病毒pAdxsi—CMV—PDXI／CMV—NKX6．1联合相应细胞因子分步诱导， 双硫腙染色细胞质呈亮红色，RT—PCR显示诱导后的细胞持续稳定表达胰岛素、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)等 B 细胞相关分子；Westernblotting、免疫细胞化学与间接荧光结果亦相似。所诱导的实验组细胞经5．5和25mmol／L 葡萄糖刺激后胰岛素分泌水平分别为 (1240．4±109．3)mU／L和 (3539．8±245．1)mU／L，并显著高于对照组的 分泌量。移植实验组细胞可恢复STZ糖尿病小鼠血糖正常水平。结论：PDX1与NKX6．1联合细胞因子在体外能 有效地诱导BMSCs分化为胰岛B样细胞；这种胰岛B样细胞移植能有效恢复STZ糖尿病小鼠的血糖正常水平，维 持小鼠良好的生存状态，这将为治疗糖尿病带来新的希望。 [关键词】 胰腺十二指肠同源框 1；NK6转录因子相关 1；间充质干细胞 ；腺病毒载体 [中图分类号] Q813 【文献标识码】 A Generationofinsulin —producing cellsfrom PDX1andNKX6．1gene— modifiedbonemarrow mesenchymalstem cells TANG Xiao—long，ZHANG Yuan，ZHU Kang—er，GUO Min (InstituteofHematology，MedicalCollege，．~nanUniversity，Guangzhou510632，Chn／a．E—mail：txljd2006@ 126．coDz) [ABSTRACT] AIM-．Todifferentiatebonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)intofunctionalinsulin—pro- ducingceHstoproducesufficientpancreaticisletcellsfortransplnatation．METHODS：Recombinna tadenovirnsvectors carryingPDX1nadNKX6．1geneswereconstructednadthebonemalTow mesenchymalstem cellswereinfcetedbythere— combinantadenoviruscomb inedwi山 severalcytokinesofrdifferentiation．TheexpressionsofPDX1．NKX6．1andinsulin andC——peptideinthedffierentiatedbonemalTOW mesenchymal stem cellswere detcetde byRT ——PCR andWestern blot-· ting．AfterthedifferentiatedbonemalTOW mesenchymalstem cellsweretransp