MicroRNA-30a调控Beclin-1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护效应.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiolo~ 2012，28(4)：583—588 · 583 · [文章编号] 1000—47l8(2012)04—0583—06 MicroRNA一30a调控 Beclin一1 对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护效应 晏 浩 ， 徐建军 ， 李文林 ， 朱书强 ， 龙 翔 ， 车建鹏 ， 陈立如 (南昌大学 第二附属医院胸心外科，医学院，江西 南昌330006) [摘 要] 目的：观察microRNA一30a(miR一30a)在原代心肌细胞缺氧复氧中的作用，探讨miR一30a保护 缺血再灌注心肌的分子机制。方法：重组构建慢病毒miR一30a表达载体(LV—GFP—miR一30a)感染原代乳 鼠心 肌细胞 ，构建缺氧复氧损伤模型。实验分为正常培养组、单纯缺氧复氧组、LV—GFP加缺氧复氧组、LV—miR一30a — GFP加缺氧复氧组和3一甲基腺嘌呤(3一MA)加缺氧复氧组。Real—timePCR检测缺氧复氧和慢病毒感染对 miR一30a的表达影响，Westernblotting检测LC3和 Beclin一1蛋白表达变化，TUNEL和PI染色检测缺氧复氧后心 肌细胞死亡情况。结果：(1)缺氧复氧后心肌miR一30a表达水平下调(P0．05)；(2)慢病毒 miR一30a表达载体 高效感染后心肌细胞 miR一30a表达水平上调(P0．05)，心肌过表达 miR一30a下调 Beclin一1蛋白表达 (P 0．05)；(3)心肌过表达miR一30a抑制缺氧复氧后 Beclin一1表达 (P0．05)；3一MA处理减少缺氧复氧后心肌Be— clin一1表达，减少缺氧复氧后LC3一I转化为 LC3一II(P0．05)；(4)过表达 miR一30a和3一MA处理减少缺氧 复氧后心肌细胞凋亡(P0．05)。结论 ：心肌细胞过表达miR一30a显著下调 Beclin一1；抑制 自噬可以减少缺氧复 氧后心肌细胞死亡。 [关键词] 缺血再灌注；细胞凋亡；微小 RNA；自吞噬作用 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．40．002 ProctectiveeffectofmicroRNA -—30aon regulatingbeclin-—1expression inhypoxia—-reoxygenatedneonatalratcardiomyocytes YANHao，XUJian—jun，LIWen—lin，ZHUShu—qiang，LONGXiang，CHEJian — peng ．CHEN Li一1ll (DepartmentofCardiacSurgery，TheSecondAffiliatedHospital，MedicalCollege，NanchangUnive~ity，Nanchang 330006，China．E—mail：x~ianjun3526@163．corn) [ABSTRACT] AIM ：ToexplorethepotentialmechanismofmicroRNA一30a(miR一30a)overexpressioninneo— natalratcardiomyocytesduringhypoxia／reoxygenation(H／R)．METHODS：ThemiR一30aoverexpressionwasinduced inprimaryneonatalrateardiomyoeytesbylentivirusffansfection．Thecardiomyocytesweredividedinto5 groups：normal group，H／Rgroup，LV—GFP+H／Rgroup，LV—GFP—miR一30a+I-I／Rrgoupnad3一me