pH变化对非洲爪蟾卵母细胞ATP受体激活电流的影响.pdfVIP

维普资讯 理杂志 ChineseJournalof Y Z： iZ2；箜 =塑 · 143l · [文章编号] 1000—4718(2007)07—1431—03 pH变化对非洲爪蟾卵母细胞 ATP受体 激活电流的影响木 张玉芹 ， 王照宇 ， 聂 辉 ， 程剑侠 ， 李之望 (’武汉科技大学医学院，湖北 武汉 430080；华中科技大学同济医学院，湖北 武汉 430030) [摘 要] 目的：观察pH变化对非洲爪蟾卵母细胞A，IP受体激活电流 (I )的影响。方法：采用双极电压 钳技术记录卵母细胞膜 ATP受体介导的电流。结果：检测的绝大多数细胞对ATP敏感，pH为7．4的ATP引起细 胞特征性膜电流，并呈浓度依赖性。该电流包括3个部分 ：快内向电流(D1)，慢内向电流(D2)和慢外向电流 (H)。 当细胞外pH降低到6．0、5．5时，10．3mol／L的ATP引起的IATV幅值明显被抑制，并 以对 D1电流抑制最明显。胞 内应用G蛋白抑制剂阻断P2Y受体，对D1电流影响不大，D2电流明显减小。胞外应用 P2X受体拮抗剂 ，对D1电 流有明显的阻断作用。结论：pH值降低对爪蟾卵母细胞 I 的抑制主要通过对P2X受体的影响而实现。 [关键词] 氢离子浓度；爪蟾卵母细胞 ；受体，嘌呤能P2 [KEYWORDS] Hydrogen—ionconcentration；Xenopusoocytes；Receptors，purinergicP2 [中图分类号] R338．1 [文献标识码] A 爪蟾卵母细胞膜上有多种受体共存，其中P2受体 (ATP 仪器上海有限公司)测试。实验所用 的药品：ATP、G蛋 白抑 受体)近年来倍受关注。P2受体分为离子型的P2X受体和 制剂 (GDP—B—S)、吡多醛 一5一磷酸一6一偶氮苯基 一2，4 代谢型的P2Y受体…。细胞外的ATP可通过激活 ATP受体 一 二磺酸 (PPADS)均购于 Sigma公司，用Ringer’S液配制，再 引起细胞生物学效应。研究表明，ATP受体激活参与卵母细 用 NaOH调节到所需要的pH值。实验在 18—20℃室温条 胞的受精反应和细胞发育过程的调控。ATP受体受很多因 件下进行。 素的影响 ，在许多病理情况下 ，如炎症、缺血、缺氧 、肿瘤 2 电生理记录 等，伴随着组织剧烈酸化 ，影响ATP受体的功能。已有实验 采用双电极电压钳记录方法。用微电极拉制仪拉制玻 表明，在一定范围内pH降低对大 鼠背根神经节神经元 ATP 璃微 电极 ，电压 电极和电流电极尖端直径分别为 3—5 m和 激活电流具有增强作用 ，而细胞外酸化对爪蟾卵母细胞 5—7 m，电极 内充灌液分别为0．15mol／L和3mol／L的KC1 ATP受体激活电流(I )的影响未见报道。本研究的目的是 溶液，电极电阻分别为5—10Mfl和0．1—1Mfl。参考电极 以ATP受体激活诱发的膜电流为指标，观察离体单个非洲爪 用Ag／AgCl电极与细胞池相连，并用盐桥固定。实验过程中 蟾卵母细胞 I 的特征和细胞外pH值改变对 I 的影响及 用Ringer’S液(含 mmol／L：NaC195，KC11，MgCl21，CaC121， 其影响机制。 HEPES5，用 NaOH将溶液pH值调至7．2—7．5)以2mL／min 的速度持续流入细胞池灌流细胞，细胞池出口与恒流泵相连， 材 料 和 方 法 以同样的速度抽出灌流液。通过微操纵器将电压电极和电 1 卵母细胞标本的制备及实验仪器 流 电极插入细胞，选取静息膜电位大于 一30mV的卵母细胞 实验动物为 150g一200g成熟的雌性非洲爪蟾 (由中国 进行实验，钳制 电压为 一