TIMP-1B细胞表位的预测和鉴定.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(1o)：1917—1920 · 19l7 · [文章编号】 1000-4718(2012)1O一1917一o4 TIMP一1B细胞表位的预测和鉴定 杜 玲 ， 孙 俊 ， 刘建生 ， 程计林 (上海市公共卫生临床中心消化科，上海瑞金医院集团闵行区中心医院消化科，上海 201508) [摘 要] 目的：预测并鉴定金属蛋白酶组织抑制物 一1(TIMP一1)蛋白B细胞表位。方法：采用DNAStar 和BcePred分析软件联合预测TIMP一1的B细胞表位 ，以此合成 8分支多抗原肽结构的表位肽 (MAP)，并与通用 型T辅助表位肽(VQGEESNDK，氨基酸 163—171)联合免疫家兔，检测免疫血清效价，用Westernblotting和间接酶 联免疫吸附测定等方法鉴定其特异性和抗体亲和力。结果：软件预测显示，TIMP一1的第27～41位(MAP1)、第 57～7l位(MAP2)、第95～109位(MAP3)和第 193—207位(MAP4)氨基酸序列最可能为其优势B细胞表位。抗 体滴度动态检测表明，MAP2、MAP3和MAP4均能诱导产生特异性抗体，其中MAP2和MAP4诱导的抗体水平最 高；免疫印迹证实 MAP2、MAP3和MAP4诱导产生特异性的TIMP一1抗体；间接ELISA证实 MAP4与商品化TIMP 一 1抗体具有最高的亲和力。结论 ：TIMP一1的第27～41位和第 193—207位氨基酸为其优势B细胞表位，其中第 193—207位氨基酸的免疫原性最强，这为TIMP一1多肽抗体和B细胞优势短肽疫苗研制提供了理论依据。 [关键词] 金属蛋白酶组织抑制物一1；表位 ，B淋巴细胞；多抗原肽；免疫原性 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．10．035 Predictionandidentificati0n 0fB —cellepitopes0fTIM P 一1 DULing ，SUNJun ，UUJian—sheng ，CHENGJi—lin (DepaamemofGastroenterology，ShanghaiPublicHeahhClinicalCenter，DepaamemofGastroenteroolyg ，ShanghaiMin— hangDistrictCentralHospitalofRuijinHospitalGroup，Shanghai201508，China．E—mail：filincheng@gmail．corn； @ sina．eom [ABSTRACT] AIM：TopredictandidentifytheB—cellepitopesofhumnatissueinhibitorofmetalloproteinase一 1(TIMP一1)．METHODS：ThepredictionofB—cellepitopesofTIMP一1wasconductedbyDNAStarandBcePredsoft- wares，nad8一brnachformofmultiplenatigenpeptide(MAP)wassynthesized，whichweresubsequentlyusedofrimmuni· zingrabbitsmixedwithna universalT—helperepitopehumna IL一1Bpeptide(VQGEESNDK，aminoacid163～171)． Th eimmunogenieityofthesynthesizedpeptidewas evaluatedbymonitoringtheantiserum titernadna alysisofbindingaffin— itywitllnatibody．Th especificityofproducednatiserumwas detectedbyWesternblotting．RESULTS：Amino