TNF-α对小鼠脑微血管内皮细胞RhoA活性的影响.pdfVIP

· l2l0· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(6)：1210—1212、1217 [文章编号】 1000-4718(2011)o6—1210—04 · 短篇论著 · TNF一0对【小 鼠脑微血管内皮细胞 RhoA活性的影响术 邓小鹿， 彭 镜， 何 芳， 杨丽芬， 吴丽文， 尹 飞 (中南大学湘雅医院儿科，湖南 长沙410008) [摘 要] 目的：观察肿瘤坏死因子 一仅(TNF—eL)对小鼠脑微血管内皮细胞 RheA活性和表达的影响，探讨 pl15RhoGEF是否参与其调控。方法：以小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd．3为实验对象，TNF一0(【1O g／L)刺激后 pull—down检测RheA活性，Westernblotting检测RheA总蛋白表达；再将bEnd．3分为siRNA组(转染 pl15RhoGEF siRNA)和对照组(转染无活性的nsRNA)，Westernblotting检测 pl15RhoGEF蛋白的表达，pull—down检测TNF一0【 预处理后RheA活性的变化。结果：RheA活性在TNF一仪刺激 30min后明显增高达到高峰，RheA总蛋 白表达在 TNF—oL刺激 12h和24h显著上调；TNF—oL刺激siRNA组bEnd．3细胞30rain后，Rhea活性较对照组明显降低。 结论：TNF—e1．可导致小鼠脑微血管内皮细胞RheA活性增加和表达上调，pl15RhoGEF可能参与了TNF一0【诱导 Rh0A活化的调控过程。 [关键词] 肿瘤坏死因子；Rho；内皮细胞 [中图分类号】 R363 [文献标识码】 A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．06．030 A novelmechanism ofRheA activation inducedbytumornecrosisfactor 一 0【inmousecerebralmicrovascularendothelialcells DENGXiao—lu，PENGJing，HEFang，YANGLi—fen，WULi—wen，YINFei (DepartmentofPediatrics，XiangyaHospital，CentralSouthUniversity，Changsha410008，China．E—mail：yf2323@hot— mail．com) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheeffectsoftumornecrosisfactor0【(TNF一0)【onRheAactivityinmouse cerebralmicrovascularendothelialcells．METHODS：ThebEnd．3 cells，amousebrainmicrovascularendothelialcell line．werecultured．RheA activitywasanalyzedbypull—downassay10rain，30rainand60minafterTNF一 treatment． ExpressionofRheA proteinwasdeterminedbyWesternblotting1h，3h，6h，12hand24hafterTNF一0【treatment． SmallinterferingRNA (siRNA)targetingtopl15RhoGEForcontrolnsRNAwastransfeetedintobEnd．3cells．Theex— pressionofpl15RhoGEFwasdetemr inedbyWestern blotting，andRheA activitywasdetectedbypull—downassay30min afterTNF一0ltreatment．RESULTS：RheAac